A direct and continuous assay for the determination of thioredoxin reductase activity in cell lysates.
A direct and continuous assay for the determination of thioredoxin reductase activity in cell lysates.
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用于测定细胞裂解物中硫氧还蛋白还原酶活性的直接连续测定。
DOI：
10.1016/j.ab.2013.08.013
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发表时间：
2013-12-01
影响因子：
2.9
通讯作者：
Heintz NH
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Cunniff B;Snider GW;Fredette N;Hondal RJ;Heintz NH
硫氧还蛋白还原酶（TR）是一种氧化还原酶，负责维持硫氧还蛋白处于还原状态，从而有助于适当的细胞氧化还原稳态。哺乳动物TR的C-末端活性位点含有对其活性至关重要的稀有氨基酸硒代半胱氨酸。在临床病症如癌症、病毒感染和各种炎症过程中发现由于细胞氧化还原稳态的变化而引起的硫氧还蛋白还原酶活性的改变，因此硫氧还蛋白活性的定量可以是临床病症的有价值的指标。在这里，我们描述了一种新的，直接测定（称为SC-TR测定），以确定TR的活性的基础上减少硒代胱氨酸，二硒桥氨基酸。SC-TR测定不是像旧方法那样作为终点测定，而是直接监测TR在340 nm处对NADPH的连续消耗，因为它还原硒代胱氨酸。SC-TR测定可使用传统分光光度法在比色皿中使用，或使用酶标仪作为基于96孔板的形式使用。此外，SC-TR测定与非离子去污剂的使用相容，使其比使用细胞裂解物的其他方法更通用。
Thioredoxin reductase (TR) is an oxidoreductase responsible for maintaining thioredoxin in the reduced state, thereby contributing to proper cellular redox homeostasis. The C-terminal active site of mammalian TR contains the rare amino acid selenocysteine, which is essential to its activity. Alterations in thioredoxin-reductase activity due to changes in cellular redox homeostasis are found in clinical conditions such as cancer, viral infection, and various inflammatory processes, and quantification of thioredoxin-activity can therefore be a valuable indicator of clinical conditions. Here we describe a new, direct assay (termed the SC-TR assay) to determine the activity of TR based upon the reduction of selenocystine, a diselenide-bridged amino acid. Rather than being an end-point assay as is in older methods, the SC-TR assay directly monitors the continuous consumption of NADPH at 340 nm by TR as it reduces selenocystine. The SC-TR assay can be used in a cuvette using traditional spectrophotometry, or as a 96-well plate based format using a plate reader. In addition, the SC-TR assay is compatible with the use of non-ionic detergents, making it more versatile than other methods using cell lysates.
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影响因子：
5.8
作者：
Biewenga, GP;Dorstijn, MA;Bast, A
通讯作者：
Bast, A
影响因子：
3.7
作者：
Newick K;Cunniff B;Preston K;Held P;Arbiser J;Pass H;Mossman B;Shukla A;Heintz N
通讯作者：
Heintz N
DOI：
10.1165/rcmb.2011-0134oc
发表时间：
2012-01-01
影响因子：
6.4
作者：
Hristova, Milena;Spiess, Page C.;van der Vliet, Albert
通讯作者：
van der Vliet, Albert
影响因子：
7.4
作者：
Marzano, Christine;Gandin, Valentina;Rigobello, Maria Pia
通讯作者：
Rigobello, Maria Pia
影响因子：
4.5
作者：
Yang, XM;Wu, XL;Kehrer, JP
通讯作者：
Kehrer, JP