Topological analysis of type 3 secretion translocons in native membranes.
Topological analysis of type 3 secretion translocons in native membranes.
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DOI：
10.1016/bs.mie.2021.01.036
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发表时间：
2021
影响因子：
--
通讯作者：
Heuck AP
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Tang Y;Guo H;Vermeulen AJ;Heuck AP
PFP（成孔蛋白）使细胞膜穿孔，形成水孔并允许离子和极性分子通过。通过将这些蛋白质的高分辨率结构信息与生物化学和生物物理方法相结合，许多 PFP 的分子机制已得到阐明。然而，一些 PFP 不具有稳定的构象，难以进行体外研究。这些蛋白质的一个例子是细菌 3 型分泌 (T3S) 易位蛋白。易位子由细菌分泌，插入靶细胞膜形成易位子孔。这些易位子为 T3S 毒素进入真核细胞提供了门户。鉴于 T3S 系统在发病机制中发挥的重要作用，需要研究细胞膜中这些易位子孔的方法。通过结合蛋白质修饰和选择性渗透和溶解真核细胞膜的方法，我们建立了一个实验程序，利用铜绿假单胞菌菌株变体和 HeLa 细胞系分析铜绿假单胞菌 T3S 易位子的拓扑结构。
PFPs (Pore-forming proteins) perforate cellular membranes to create an aqueous pore and allow the passage of ions and polar molecules. The molecular mechanisms for many of these PFPs have been elucidated by combining high resolution structural information of these proteins with biochemical and biophysical approaches. However, some PFPs do not adopt stable conformations and are difficult to study in vitro. An example of these proteins are the bacterial Type 3 Secretion (T3S) translocators. The translocators are secreted by the bacterium and they insert into the target cell membrane to form a translocon pore. These translocons provide a portal for the passage of T3S toxins into eukaryotic cells. Given the important role that the T3S systems play in pathogenesis, methods to study these translocon pores in cellular membranes are needed. Using a combination of protein modifications and methods to selectively permeate and solubilize eukaryotic membranes, we have established an experimental procedure to analyze the topology of the Pseudomonas aeruginosa T3S translocon using P. aeruginosa strain variants and HeLa cell lines.
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