High performance liquid chromatography method for the detection of released purinergic and biogenic amine signaling molecules from in vitro ileum tissue.
High performance liquid chromatography method for the detection of released purinergic and biogenic amine signaling molecules from in vitro ileum tissue.
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高效液相色谱法检测体外回肠组织释放的嘌呤能和生物胺信号分子。
DOI：
10.1002/jssc.200900853
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发表时间：
2010
影响因子：
3.1
通讯作者：
Lwin A
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Lwin A
已知三磷酸腺苷（ATP）和5-羟色胺（5-HT）在胃肠道的功能和活动中发挥关键作用;然而，尚未建立在一种测定中监测这些信号分子的方法。我们已经开发了一个简单的色谱方法，使用紫外/可见光检测嘌呤和生物胺信号分子的分析。在等度模式下实现色谱分离，其中移动的相由5%甲醇和95%磷酸铵缓冲液与10 mM四丁基硫酸氢铵组成。45°C的柱温提供了在14.7分钟内分离所有分析物的手段。分离范围内所有组分均观察到良好的分离度和拖尾因子。ATP和5-HT的LOD分别为30和317 nM，线性范围为10-0.02 μM。通过使用组织储存30 min后的缓冲液中的等分试样进行体外测量，以测量释放的分子。在存在和不存在内源性ATP的情况下进行回肠组织的体外测定。结果表明，ATP可促进5-HT释放。该方法可用于研究这些关键信号分子在胃肠道疾病中的改变。
Adenosine triphosphate (ATP) and serotonin (5‐HT) are known to play key roles in the function and activity of the gastrointestinal tract; however, no methods have been established for the monitoring of these signaling molecules within one assay. We have developed a simple chromatographic methodology using UV/visible detection for the analysis of purinergic and biogenic amine signaling molecules. The chromatographic separation was achieved in an isocratic mode, where the mobile phase consisted of 5% methanol and 95% ammonium phosphate buffer with 10 mM tetrabutylammonium bisulfate. Column temperature of 45°C provided the means to separate all analytes within 14.7 min. Good resolution and tailing factors were observed for all components within the separation. The LOD for ATP and 5‐HT was 30 and 317 nM, respectively, with a linear range from 10–0.02 μM.In vitromeasurements were carried out by using aliquots from the buffer the tissue was stored in after 30 min to measure released molecules.In vitroassay of ileum tissue in the presence and absence of endogenous ATP was carried out. Results showed that ATP can elevate 5‐HT release. This method can be used to study alterations in these key signaling molecules with gastrointestinal disease.
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