RNA编辑酶ADAR1在Huh7.5.1细胞中抑制HCV复制的研究_袁琳
RNA编辑酶ADAR1在Huh7.5.1细胞中抑制HCV复制的研究_袁琳
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DOI：
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发表时间：
2018
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
涂增
中科院分区：
文献类型：
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作者：
袁琳;杨生永;胡源;胡接力;段晓琼;林温育;黄爱龙;涂增
探究干扰素在Huh7.5.1细胞中对RNA编辑酶（Adenosine deaminases acting on RNA 1，ADAR1）表达影响，以及ADAR1对（hepatitis C virus，HCV）复制的调控作用。方法：干扰素（IFN-α，30IU/mL）刺激Huh7.5.1细胞后，利用Real-time PCR和Western blot检测ADAR1的表达水平的变化，同时HCV以一定滴度（0.2 MOI）感染Huh7.5.1细胞，观察IFN-α对HCV复制影响；利用siRNA降低ADAR1表达，过表达质粒（ADAR1 p110和p150）增加ADAR1表达，并进一步利用基因编辑技术建立ADAR1稳定敲除细胞株，明确ADAR1与HCV复制关系。结果：IFN-α诱导Huh7.5.1细胞ADAR1 p150表达（t=10.400,P=0.007，48h；t=19.390,P=0.002，72h），而不影响ADAR1 p110表达（t=0.806,P=0.472，48h；t=1.929,P=0.133，72h），同时IFN-α可显著抑制HCV复制（t=10.170,P=0.001，48h；t=35.810,P=0.000，72h）。ADAR1 p110和p150过表达48h后，HCV病毒核酸和蛋白水平均显著低于空白对照（P=0.004， P=0.015）；ADAR1 siRNA干扰后，HCV复制增加了2倍以上，差异显著（t=13.530，P=0.000）；利用Crispr-cas9技术敲除掉Huh7.5.1中的ADAR1后，HCV复制也明显增加（t=5.259，P=0.023）； ADAR1干扰后IFN-α仍然存在对HCV明显的抑制作用（t=9.146，P=0.001）。结论：IFN诱导蛋白ADAR1可以抑制HCV复制，且ADAR1部分介导了IFN-α对HCV复制的抑制。