The α3β3γ Subcomplex of the F1-ATPase from the Thermophilic Bacillus PS3 with the βT165S Substitution Does Not Entrap Inhibitory MgADP in a Catalytic Site during Turnover*
The α3β3γ Subcomplex of the F1-ATPase from the Thermophilic Bacillus PS3 with the βT165S Substitution Does Not Entrap Inhibitory MgADP in a Catalytic Site during Turnover*
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具有 βT165S 取代的嗜热芽孢杆菌 PS3 的 F1-ATP 酶的 α3β3γ 亚复合物在周转期间不会将抑制性 MgADP 捕获在催化位点*
DOI：
--
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发表时间：
1996
影响因子：
4.8
通讯作者：
W. Allison
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
J. Jault;C. Dou;N. Grodsky;T. Matsui;Masasuke Yoshida;W. Allison
比较了突变体α3(βT165S)3γ和野生型α3β3γ亚配合物TF1的水解特性。野生型配合物水解50 μM ATP为三个动力学相，而突变型配合物水解50 μM ATP为线性速率。在Mg2+存在下，ADP稍过量孵育后，野生型复合物水解2mm ATP，并有较长的滞后。相反，在这些条件下预先孵育突变复合物并不影响ATP水解动力学。野生型复合物的atp酶活性被0.1%的十二烷基二甲胺氧化物刺激4倍，而这种浓度的十二烷基二甲胺氧化物抑制突变复合物25%。与野生型复合物相比，突变型复合物的活性对叠氮化物的周转依赖性抑制的敏感性要低得多。这一比较表明，突变体复合物在周转过程中没有在催化位点捕获大量抑制性MgADP，这得到了以下观察结果的支持。野生型复合物催化的ATP水解会随着检测培养基中Mg2+浓度的增加而逐渐受到抑制，而突变型复合物则对Mg2+浓度的增加不敏感。Lineweaver-Burk图显示，野生型配合物对20-2000 μM ATP的水解速率为两相，表观Km值为30 μM和470 μM，对应的kcat值为26和77 s−1。相比之下，突变体复合物的Lineweaver-Burk图在ATP浓度范围内呈线性，显示Km为133 μM， kcat为360 s−1。
The hydrolytic properties of the mutant α3(βT165S)3γ and wild-type α3β3γ subcomplexes of TF1 have been compared. Whereas the wild-type complex hydrolyzes 50 μM ATP in three kinetic phases, the mutant complex hydrolyzes 50 μM ATP with a linear rate. After incubation with a slight excess of ADP in the presence of Mg2+, the wild-type complex hydrolyzes 2 mM ATP with a long lag. In contrast, prior incubation of the mutant complex under these conditions does not affect the kinetics of ATP hydrolysis. The ATPase activity of the wild-type complex is stimulated 4-fold by 0.1% lauryl dimethylamine oxide, whereas this concentration of lauryl dimethylamine oxide inhibits the mutant complex by 25%. Compared with the wild-type complex, the activity of the mutant complex is much less sensitive to turnover-dependent inhibition by azide. This comparison suggests that the mutant complex does not entrap substantial inhibitory MgADP in a catalytic site during turnover, which is supported by the following observations. ATP hydrolysis catalyzed by the wild-type complex is progressively inhibited by increasing concentrations of Mg2+ in the assay medium, whereas the mutant complex is insensitive to increasing concentrations of Mg2+. A Lineweaver-Burk plot constructed from rates of hydrolysis of 20-2000 μM ATP by the wild-type complex is biphasic, exhibiting apparent Km values of 30 μM and 470 μM with corresponding kcat values of 26 and 77 s−1. In contrast, a Lineweaver-Burk plot for the mutant complex is linear in this range of ATP concentration, displaying a Km of 133 μM and a kcat of 360 s−1.
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Boyer,PD
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10.1016/s0021-9258(20)80703-0
发表时间：
1993-09
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
J. Weber;S. Wilke-Mounts;Rita S. F. Lee;E. Grell;A. E. Senior
通讯作者：
J. Weber;S. Wilke-Mounts;Rita S. F. Lee;E. Grell;A. E. Senior
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通讯作者：
Amzel,LM
DOI：
10.1016/s0021-9258(18)33672-x
发表时间：
1982-10
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
M. Gresser;J. A. Myers;P. Boyer
通讯作者：
M. Gresser;J. A. Myers;P. Boyer