Detection of focal adhesion kinase activation at membrane microdomains by fluorescence resonance energy transfer.
Detection of focal adhesion kinase activation at membrane microdomains by fluorescence resonance energy transfer.
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DOI：
10.1038/ncomms1414
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发表时间：
2011-07-26
影响因子：
16.6
通讯作者：
Wang Y
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Seong J;Ouyang M;Kim T;Sun J;Wen PC;Lu S;Zhuo Y;Llewellyn NM;Schlaepfer DD;Guan JL;Chien S;Wang Y
粘着斑激酶 (FAK) 的正确亚细胞定位对于许多细胞过程至关重要。然而，目前尚不清楚 FAK 活性如何在亚细胞区室中受到调节。为了可视化不同膜微域的 FAK 活性，我们开发了一种基于荧光共振能量转移 (FRET) 的 FAK 生物传感器，并将其定位到质膜的耐去污剂膜 (DRM) 区域内或之外。在这里，我们发现，在细胞粘附到细胞外基质蛋白或血小板衍生生长因子（PDGF）刺激时，靶向DRM的FAK生物传感器的FRET响应比非DRM区域更强，这表明FAK激活可以发生在DRM微域处。进一步的实验表明，PDGF 诱导的 FAK 激活是由 Src 活性介导和维持的，而细胞粘附上的 FAK 激活独立于 Src 激活，而且实际上是 Src 激活所必需的。因此，FAK 在膜微区上被激活，并具有不同的激活机制，以响应不同的生理刺激。
Proper subcellular localization of focal adhesion kinase (FAK) is crucial for many cellular processes. It remains, however, unclear how FAK activity is regulated at subcellular compartments. To visualize the FAK activity at different membrane microdomains, we develop a fluorescence resonance energy transfer (FRET)-based FAK biosensor, and target it into or outside of detergent-resistant membrane (DRM) regions at the plasma membrane. Here we show that, on cell adhesion to extracellular matrix proteins or stimulation by platelet-derived growth factor (PDGF), the FRET responses of DRM-targeting FAK biosensor are stronger than that at non-DRM regions, suggesting that FAK activation can occur at DRM microdomains. Further experiments reveal that the PDGF-induced FAK activation is mediated and maintained by Src activity, whereas FAK activation on cell adhesion is independent of, and in fact essential for the Src activation. Therefore, FAK is activated at membrane microdomains with distinct activation mechanisms in response to different physiological stimuli.
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影响因子：
7.8
作者：
Gaus, Katharina;Le Lay, Soazig;Balasubramanian, Nagaraj;Schwartz, Martin A
通讯作者：
Schwartz, Martin A
DOI：
10.1073/pnas.0807537105
发表时间：
2008-09-23
影响因子：
11.1
作者：
Ouyang, Mingxing;Sun, Jie;Wang, Yingxiao
通讯作者：
Wang, Yingxiao
DOI：
10.1126/stke.2002.125.pl3
发表时间：
2002-03-26
期刊：
Science's STKE : signal transduction knowledge environment
影响因子：
--
作者：
Balla, Tamas;Varnai, Peter
通讯作者：
Varnai, Peter
影响因子：
56.9
作者：
Palazzo, AF;Eng, CH;Gundersen, GG
通讯作者：
Gundersen, GG
影响因子：
3.3
作者：
Gao, Xinxin;Zhang, Jin
通讯作者：
Zhang, Jin