Localization of Cys133 of rabbit skeletal troponin-I with respect to troponin-C by resonance energy transfer.
Localization of Cys133 of rabbit skeletal troponin-I with respect to troponin-C by resonance energy transfer.
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通过共振能量转移对兔骨骼肌钙蛋白-I 的 Cys133 相对于肌钙蛋白-C 进行定位。
DOI：
10.1016/s0006-3495(98)78017-8
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发表时间：
1998
影响因子：
3.4
通讯作者：
Tao,T
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Luo,Y;Wu,JL;Gergely,J;Tao,T
我们使用共振能量转移技术与距离几何分析相结合，在存在和不存在 Ca2+ 的情况下，定位三元肌钙蛋白复合物和二元 TnC·TnI 复合物中肌钙蛋白-I (TnI) 相对于肌钙蛋白-C (TnC) 的 Cys133。选择TnI的Cys133是因为我们之前的工作表明，含有该残基的TnI区域在肌动蛋白和TnC之间经历Ca2+依赖性运动，并且可能在肌钙蛋白的调节功能中发挥重要作用。为此，通过定点诱变构建了在位置 133 处具有单个 Cys 的 TnI 突变体和在位置 5、12、21、41、49、89、98、133 和 158 处具有单个 Cys 的 TnC 突变体。然后测量 TnI Cys133 和 TnC 中九个残基中每一个残基之间的距离。使用最小二乘最小化程序，我们确定了 TnI Cys133 在 TnC 晶体结构坐标系中的位置。我们的结果表明，在存在 Ca2+ 的情况下，TnI Cys133 位于 TnC N 末端叶下方残基 12 附近，并在去除 Ca2+ 后移动 12.6Å。 TnI Cys133 和响应 Ca2+ 而发生重大构象变化的 TnC 区域大致位于 TnC 中央螺旋的相对两侧。这表明 TnI 中与 TnC 发生 Ca2+ 依赖性相互作用的区域不同于与肌动蛋白相互作用的区域。
We have used the technique of resonance energy transfer in conjunction with distance geometry analysis to localize Cys133of troponin-I (TnI) with respect to troponin-C (TnC) in the ternary troponin complex and the binary TnC·TnI complex in the presence and absence of Ca2+. Cys133of TnI was chosen because our previous work has shown that the region of TnI containing this residue undergoes Ca2+-dependent movements between actin and TnC, and may play an important role in the regulatory function of troponin. For this purpose, a TnI mutant with a single Cys at position 133, and TnC mutants, each with a single Cys at positions 5, 12, 21, 41, 49, 89, 98, 133, and 158, were constructed by site-directed mutagenesis. The distances between TnI Cys133and each of the nine residues in TnC were then measured. Using a least-squares minimization procedure, we determined the position of TnI Cys133in the coordinate system of the crystal structure of TnC. Our results show that in the presence of Ca2+, TnI Cys133is located near residue 12 beneath the N-terminal lobe of TnC, and moves away by 12.6Å upon the removal of Ca2+. TnI Cys133and the region of TnC that undergoes major change in conformation in response to Ca2+are located roughly on opposite sides of TnC's central helix. This suggests that the region in TnI that undergoes Ca2+-dependent interaction with TnC is distinct from that interacting with actin.
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--
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