大鼠抗人β-catenin多克隆抗体的制备与鉴定
大鼠抗人β-catenin多克隆抗体的制备与鉴定
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DOI：
10.3969/j.issn.1000-484x.2019.16.013
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发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
刘晓平
中科院分区：
文献类型：
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作者：
牛夏忆;李淼;张倩;陈云雨;刘晓平
目的:原核表达和分离纯化人β-catenin(138-781 aa)蛋白并制备特异性大鼠抗人β-catenin多克隆抗体。方法:利用PCR扩增β-catenin基因片段并克隆至pET-30a(+)表达载体构建重组质粒。将重组质粒转化到大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(DE3)中,经原核表达优化后,诱导β-catenin蛋白表达,以SDS-PAGE和Western blot实验进行鉴定。采用亲和层析方法分离纯化β-catenin蛋白,以荧光偏振实验进行生物学活性鉴定。用β-catenin蛋白为抗原免疫大鼠制备多克隆抗体,随后采用ELISA和Western blot实验检测多克隆抗体的效价和抗原特异性。结果:成功进行了β-catenin蛋白的原核表达与分离纯化。荧光偏振实验表明纯化的β-catenin蛋白具有良好的生物学活性。ELISA实验表明抗人β-catenin多克隆抗体效价可达1∶128 000。Western blot实验证实抗人β-catenin多克隆抗体具有良好的抗原特异性。结论:成功进行了大鼠抗人β-catenin多克隆抗体的制备与鉴定,为深入研究β-catenin的生物学功能奠定了实验基础。