Additional cassettes for epitope and fluorescent fusion proteins in Candida albicans.
Additional cassettes for epitope and fluorescent fusion proteins in Candida albicans.
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DOI：
10.1002/yea.1674
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发表时间：
2009-07
期刊：
影响因子：
2.6
通讯作者：
Berman, Judith
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Gerami-Nejad, Maryam;Dulmage, Keely;Berman, Judith
表位标签赋予特定的性质，包括与树脂或抗体的亲和力，或通过荧光显微镜检测，在生化和细胞生物学研究中非常有用。在白色念珠菌和其他几种相关酵母中，CUG密码子指定丝氨酸而不是亮氨酸，这要求定制分子工具来治疗这种重要的人类真菌病原体。在这里，我们报告了一组含有13-Myc、3HA、GST、V5或His9表位盒的质粒的构建，这些表位盒有助于通过PCR介导的表位标记蛋白的构建。普通引物用两个不同的可选标记扩增不同的标签。此外，我们还报道了密码子优化的椎间盘瘤红色荧光蛋白(DsRFP)基因的构建。与mCherryRFP一样，这种DsRFP信号可以在菌落水平的转化子中检测到，并且在绿色荧光蛋白(GFP)的双标记实验中很有用。最后，我们描述了一种结构，该结构将PCR介导的GFP两步插入编码序列内部，这有助于对分泌蛋白的标记，包括需要内源N-末端和C-末端才能发挥功能的GPI锚定细胞壁蛋白。这些试剂扩展了可用于处理白色念珠菌和CUG致病酵母菌分支的其他成员的分子工具的库。
Epitope tags that confer specific properties, including affinity for resins or antibodies or detection by fluorescence microscopy, are highly useful for biochemical and cell biological investigations. In Candida albicans and several other related yeasts, the CUG codon specifies serine instead of leucine, requiring that molecular tools be customized for use in this important human fungal pathogen. Here we report the construction of a set of plasmids containing 13-Myc, 3HA, GST, V5 or His9 epitope cassettes that facilitate PCR-mediated construction of epitope-tagged proteins. Common primer sets amplify the different tags with two different selectable markers. In addition, we report construction of a codon-optimized Discosoma red fluorescent protein (DsRFP) gene. Like mCherryRFP, this DsRFP signal is detectable in transformants at the colony level and is useful in double-labelling experiments with green fluorescent protein (GFP). Finally, we describe a construct that directs PCR-mediated two-step insertion of GFP internal to a coding sequence, which facilitates tagging of secreted proteins, including GPI-anchor cell wall proteins that require endogenous N- and C-termini for function. These reagents expand the repertoire of molecular tools available for working with C. albicans and other members of the CUG clade of pathogenic yeasts.
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影响因子：
3.1
作者：
Schaub, Yvonne;Dunkler, Alexander;Wendland, Jurgen
通讯作者：
Wendland, Jurgen
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