Ein initialer WNT-Puls verbessert Zellüberleben und Gewebeausbeute während der iPS-Chondrogenese
Ein initialer WNT-Puls verbessert Zellüberleben und Gewebeausbeute während der iPS-Chondrogenese
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初始 WNT 脉冲可提高 iPS 软骨形成过程中的细胞存活率和组织产量
DOI：
10.1055/s-0040-1717236
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发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
Diederichs S
中科院分区：
文献类型：
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作者：
Kreuser U;Richter W;Diederichs S
方法模具标准-Differenzierung der zwei Human ips-zelllinien(IMR，CB)：经AUS14 Tagen间充质干细胞移植MIT成纤维细胞生长因子/血清基质/明胶，10 ng/mlTGF-β1 für 6 Wochen。MIT 5微米CHIR99021 wurde für 24小时开始在WNT/β-连环-脉冲的一般情况下。β-catenin-Spiegel Wurden mittels Western Blot，Zellüberleben/Productels Dna-and Zellzahl-Quantifizierung and Differenzierung mittels PCRcDNA-微阵列及组织学未见文献。Ergebnisse und Schlussfolgerung Signifikant erhöhteβ-catenin-Spiegel an tag 1 Bestätigten die folergreiche chir-Behandung der Zellen.Verstärkte Senkte Senkte von Pluripotenzmarkern and Induktion von Mesodermmarkern zeigten Bessere MSCymymentwickung an tag 14 an.BIS zu 15-fach erhöhte DNA and Zellzahlen(Mittel 6，47±4，47)im Vergleich zur Kontrolle demstrierten Einen Stak促增殖chir-Effekt(Abb.a)。Sogar während der Chondrogenese wurde in der chir-Gruppe Sogar während der chir-Gruppe signifikant Veniger Zellverlust beobachtet，Resultifend in deutlich gröbe Eren Plelets MIT geittelt 42-fachöheren DNA-Werten an tag 42 im Vergleich zur Kontrolle(Abb.b)。在亲属Anteil der Kollagen-II和Proteoglykan-ablagernden Zellen blieb vergleichbar。战争结束后，我们将不再为战争而战，而不是继续战斗。Viele EZM-基因，Darunter COL6A1，Dcn and Lum，Wurden dendch den WNT/β-catenin-Puls signfikant erhöht.
Methodik Die Standard-Differenzierung der zwei humanen iPS-Zelllinien (IMR, CB) bestand aus 14 Tagen Mesenchyminduktion mit FGF/Serum auf Matrigel/Gelatine, gefolgt von 3D-Pelletkultur mit 10ng/ml TGF-β1 für 6 Wochen. Mit 5µM CHIR99021 wurde für 24h zu Beginn der Mesenchyminduktion ein WNT/β-Catenin-Puls generiert. β-Catenin-Spiegel wurden mittels Western Blot, Zellüberleben/Proliferation mittels DNA-und Zellzahl-Quantifizierung und Differenzierung mittels PCR, cDNA-Microarray und Histologie untersucht.Ergebnisse und Schlussfolgerung Signifikant erhöhte β-Catenin-Spiegel an Tag 1 bestätigten die erfolgreiche CHIR-Behandlung der Zellen. Verstärkte Senkung von Pluripotenzmarkern und Induktion von Mesodermmarkern zeigten bessere Mesenchymentwicklung an Tag 14 an. Bis zu 15-fach erhöhte DNA und Zellzahlen (Mittel 6, 47±4, 47) im Vergleich zur Kontrolle demonstrierten einen stark pro-proliferativen CHIR-Effekt (Abb. A). Sogar während der Chondrogenese wurde in der CHIR-Gruppe signifikant weniger Zellverlust beobachtet, resultierend in deutlich größeren Pellets mit gemittelt 42-fach höheren DNA-Werten an Tag 42 im Vergleich zur Kontrolle (Abb. B). Der relative Anteil der Kollagen-II und Proteoglykan-ablagernden Zellen blieb vergleichbar. War die Chondrogenese unzulänglich, wurde sie durch anfängliche WNT-Aktivierung nicht verbessert. Viele EZM-Gene, darunter COL6A1, DCN und LUM, wurden durch den WNT/β-Catenin-Puls signifikant erhöht.