In vitro methotrexate polyglutamate synthesis by rat liver folylpolyglutamate synthetase and inhibition by bromosulfophthalein.
In vitro methotrexate polyglutamate synthesis by rat liver folylpolyglutamate synthetase and inhibition by bromosulfophthalein.
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大鼠肝脏叶酰聚谷氨酸合成酶体外合成甲氨蝶呤聚谷氨酸并受溴磺酞抑制。
DOI：
10.1007/978-1-4757-5241-0_16
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发表时间：
1983
影响因子：
--
通讯作者：
Bertino,JR
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
McGuire,JJ;Hsieh,P;Coward,JK;Bertino,JR
我们使用甲氨蝶呤（MTX；4-NH2-10-CH3-PteGlu）作为底物研究了大鼠肝脏叶酰聚谷氨酸合成酶的特性。无论 MTX 还是四氢叶酸是“叶酸”底物，合成酶的许多特性（例如，L-谷氨酸和 ATP 的表观 Km 值，以及 KCl 和 2-巯基乙醇的最佳浓度）实际上是相同的。然而，这两种底物催化的反应之间存在一些显着差异。由四氢叶酸合成的产物的长度与初始单谷氨酸浓度成反比。低四氢叶酸浓度允许合成更长（n = 3）的聚谷氨酸，直至五谷氨酸长度，而高浓度导致主要合成二谷氨酸。然而，在其他相同的条件下，无论初始 MTX 浓度如何，4-NH2-10-CH3-PteGlu2 均占主导地位。此外，四氢叶酸可以很容易地转化为五谷氨酸长度，与体内大鼠肝脏中的主要成分相同。相比之下，MTX 形成的物质仅含有最多三种谷氨酸，即 4-NH2-10-CH3-PteGlu3。最后，四氢叶酸合成的最终产物 H4teGlu5 是一种以 MTX 或四氢叶酸为底物的合成酶活性相当好的抑制剂。然而，MTX 合成的最终产物 4-NH2-10-CH3-PteGlu3 对任一底物的活性抑制剂效果都很差。
We have investigated the properties of the rat liver folylpoly-glutamate synthetase using methotrexate (MTX; 4-NH2-10-CH3-PteGlu) as a substrate. Many characteristics of the synthetase (e.g., the apparent Kmvalues for L-glutamate and ATP, and the optimal concentrations of KCl and 2-mercaptoethanol) are virtually identical whether MTX or tetrahydrofolate is the “folate” substrate. There are, however, several significant differences between the reactions catalyzed with these two substrates. The length of products synthesized from tetrahydrofolate are inversely related to the initial monoglutamate concentration. Low tetrahydrofolate concentrations allow synthesis of longer (n = 3) polyglutamates, up to pentaglut-amate length, while high concentrations lead to predominantly di-glutamate synthesis. However, 4-NH2-10-CH3-PteGlu2predominates regardless of the initial MTX concentration, under otherwise identical conditions. Also, tetrahydrofolate can be readily converted to pentaglutamate lengths, the same as predominates in rat liver in vivo. In contrast, MTX forms species containing only up to a total of three glutamates, i.e., 4-NH2-10-CH3-PteGlu3. Finally, the ultimate product of synthesis from tetrahydrofolate, H4teGlu5, is a fairly good inhibitor of synthetase activity with either MTX or tetrahydrofolate as the substrate. The ultimate product of MTX synthesis, 4-NH2-10-CH3-PteGlu3, however, is a poor inhibitor of activity with either substrate.
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