Acyl-CoA subunit selectivity in the pikromycin polyketide synthase PikAIV: steady-state kinetics and active-site occupancy analysis by FTICR-MS.
Acyl-CoA subunit selectivity in the pikromycin polyketide synthase PikAIV: steady-state kinetics and active-site occupancy analysis by FTICR-MS.
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DOI：
10.1016/j.chembiol.2011.07.016
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发表时间：
2011-09-23
影响因子：
--
通讯作者：
Sherman DH
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Bonnett SA;Rath CM;Shareef AR;Joels JR;Chemler JA;Håkansson K;Reynolds K;Sherman DH
由I型模块化聚酮酶（PKS）产生的聚酮天然产物是我们药物库中的关键武器。为了重新编程这些生物合成装配线，我们必须首先了解模块化“黑匣子”中发生的步骤。本文中，通过PikAIV PKS模型系统的体外生化分析来探索酰基-CoA延伸物单元选择的关键步骤。采用两种互补的方法：稳态动力学分析的荧光探针测定，和傅立叶变换离子回旋共振质谱（FTICR-MS），以监测活性位点占用。从五个酶的变体和四个模型底物的调查结果，使一个模型被提出，涉及催化的基础上酰基辅酶A底物加载，然后由不同的水解速率。这些努力提出了一种策略，用于未来的途径工程的努力，使用非天然的延伸单位与缓慢的速率从酰基转移酶结构域的水解卸载。
Polyketide natural products produced by type I modular polyketide synthases (PKSs) are key weapons in our drug arsenal. To reprogram these biosynthetic assembly lines we must first understand the steps that occur within the modular “black boxes”. Herein, key steps of acyl-CoA extender unit selection are explored by in vitro biochemical analysis of the PikAIV PKS model system. Two complementary approaches are employed: a fluorescent-probe assay for steady state kinetic analysis, and Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance-mass spectrometry (FTICR-MS) to monitor active-site-occupancy. Findings from five enzyme variants and four model substrates have enabled a model to be proposed involving catalysis based upon acyl-CoA substrate loading followed by differential rates of hydrolysis. These efforts suggest a strategy for future pathway engineering efforts using unnatural extender units with slow rates of hydrolytic off-loading from the acyltransferase domain.
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影响因子：
--
作者：
Tang, Yinyan;Chen, Alice Y.;Khosla, Chaitan
通讯作者：
Khosla, Chaitan
DOI：
10.1073/pnas.0601924103
发表时间：
2006-07-25
影响因子：
11.1
作者：
Tang, Yinyan;Kim, Chu-Young;Khosla, Chaitan
通讯作者：
Khosla, Chaitan
影响因子：
2.9
作者：
Wu, N;Cane, DE;Khosla, C
通讯作者：
Khosla, C
影响因子：
2.9
作者：
Schnarr, NA;Chen, AY;Khosla, C
通讯作者：
Khosla, C
DOI：
10.1111/j.1432-1033.1993.tb17925.x
发表时间：
1993-05-15
期刊：
EUROPEAN JOURNAL OF BIOCHEMISTRY
影响因子：
--
作者：
ROBERTS, GA;STAUNTON, J;LEADLAY, PF
通讯作者：
LEADLAY, PF