细菌人工染色体技术在人巨细胞病毒基因组小片段序列置换突变中的应用
细菌人工染色体技术在人巨细胞病毒基因组小片段序列置换突变中的应用
复制标题
DOI：
10.12007/j.issn.0258-4646.2018.02.002
复制
发表时间：
2018
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
阮强
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
柳中洋;卢颖;韩丽英;马艳萍;齐莹;黄郁晶;阮强
目的评估细菌人工染色体技术在人巨细胞病毒基因组小片段序列突变中的作用。方法选取人巨细胞病毒LUNA基因位于UL80与UL82两个基因之间的31bp片段作为突变靶点；使用含有同源臂的卡那霉素抗性序列对目的片段进行同源重组置换；使用电转化的方法对突变成功的病毒进行拯救；使用反转录PCR和cDNA克隆测序对LUNA，UL80及UL82 mRNA 转录情况和转录本3’末端结构进行分析。结果目的基因片段缺失成功，获得的单克隆中突变成功的比例大于3%；LUNA转录起始端序列突变的病毒拯救成功；UL80与UL82的mRNA转录与转录本3’结构未受影响。结论通过Han BAC成功进行了LUNA基因转录起始端序列突变；人巨细胞病毒Han株细菌人工染色体支持有效缺失小至31bp的基因片段。