Slow, reversible, coupled folding and binding of the spectrin tetramerization domain.
Slow, reversible, coupled folding and binding of the spectrin tetramerization domain.
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血影蛋白四聚化结构域的缓慢、可逆、耦合折叠和结合。
DOI：
10.1016/j.bpj.2012.10.012
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发表时间：
2012
影响因子：
3.4
通讯作者：
J. Clarke
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
S. Shammas;J. M. Rogers;S. A. Hill;J. Clarke
许多内在无序蛋白（IDPs）在生理条件下是非结构化的。许多这些IDPs已被证明经历耦合折叠和结合反应，从而它们可以与适当的伴侣蛋白结合而获得结构。一般来说，这些系统的结合亲和力比完全结构化结构域之间的关联系统弱，微摩尔值是典型的。其中一个系统是α-和β-spectrin之间的结合，其中两个部分结构，不完整的结构域结合形成一个完全结构的三螺旋束，即spectrin四聚域。在这里，我们使用该模型系统来展示一种拟合关联和解离动力学轨迹的方法，其中，使用典型的生物物理浓度，关联反应预计是高度可逆的。我们阐明了溶液中光谱蛋白组装异常缓慢的双态动力学。在这种状态下研究动力学的优点包括获得平衡常数和速率常数的可能性，以及在低蛋白质浓度下进行实验的可能性。我们认为这种方法将特别适合于高通量突变分析的两态可逆结合过程。
Many intrinsically disordered proteins (IDPs) are significantly unstructured under physiological conditions. A number of these IDPs have been shown to undergo coupled folding and binding reactions whereby they can gain structure upon association with an appropriate partner protein. In general, these systems display weaker binding affinities than do systems with association between completely structured domains, with micromolarKdvalues appearing typical. One such system is the association betweenα- andβ-spectrin, where two partially structured, incomplete domains associate to form a fully structured, three-helix bundle, the spectrin tetramerization domain. Here, we use this model system to demonstrate a method for fitting association and dissociation kinetic traces where, using typical biophysical concentrations, the association reactions are expected to be highly reversible. We elucidate the unusually slow, two-state kinetics of spectrin assembly in solution. The advantages of studying kinetics in this regime include the potential for gaining equilibrium constants as well as rate constants, and for performing experiments with low protein concentrations. We suggest that this approach would be particularly appropriate for high-throughput mutational analysis of two-state reversible binding processes.
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影响因子：
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通讯作者：
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通讯作者：
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DOI：
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1992-04-15
影响因子：
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通讯作者：
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通讯作者：
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