A comparison of binding surfaces for SPR biosensing using an antibody-antigen system and affinity distribution analysis.
A comparison of binding surfaces for SPR biosensing using an antibody-antigen system and affinity distribution analysis.
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DOI：
10.1016/j.ymeth.2012.12.007
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发表时间：
2013-03
期刊：
影响因子：
4.8
通讯作者：
Schuck, Peter
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Zhao, Huaying;Gorshkova, Inna I.;Fu, Gregory L.;Schuck, Peter
关键词：
光学生物传感器在大分子相互作用研究中的应用需要将一个结合伙伴固定到表面。通常非常希望固定化是均匀的，并且不影响与可溶性配体的热力学和动力学结合参数。为了实现这一目标，各种传感器表面、耦合策略和表面化学都是可用的。在此之前，我们已经介绍了一种技术，通过确定不同浓度的可溶性配体获得的结合和解离轨迹家族的亲和力和动力学速率常数的分布，将固定化位点的细节水平提高到平均亲和力之外。在目前的工作中，我们探索这种亲和力分布分析如何在表面固定化的评估和优化中有用。基于这一目标，以抗体-抗原相互作用为模型系统，我们研究了不同常用传感器表面、不同总表面密度和直接固定化或亲和捕获产生的表面位点的活性、热力学和动力学结合参数以及异质性。
The application of optical biosensors in the study of macromolecular interactions requires immobilization of one binding partner to the surface. It is often highly desirable that the immobilization is uniform and does not affect the thermodynamic and kinetic binding parameters to soluble ligands. To achieve this goal, a variety of sensor surfaces, coupling strategies and surface chemistries are available. Previously, we have introduced a technique for increasing the level of detail on the immobilized sites beyond an average affinity by determining the distribution of affinities and kinetic rate constants from families of binding and dissociation traces acquired at different concentrations of soluble ligand. In the present work, we explore how this affinity distribution analysis can be useful in the assessment and optimization of surface immobilization. With this goal, using an antibody-antigen interaction as a model system, we study the activity, thermodynamic and kinetic binding parameters, and heterogeneity of surface sites produced with different commonly used sensor surfaces, at different total surface densities and with direct immobilization or affinity capture.
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