小反刍兽疫病毒非结构蛋白质C和V的基因突变的克隆与表达
小反刍兽疫病毒非结构蛋白质C和V的基因突变的克隆与表达
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DOI：
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发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
柏家林
中科院分区：
文献类型：
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作者：
和伟程;石晓玲;李菊;张潇文;刘方程;李琼毅;柏家林
反刍兽疫病毒 （peste des petits ruminants virus, PPRV）C和V 蛋白是P基因通过特殊编码方式产生的两种非结构蛋白，他们通过抑制干扰素产生在天然免疫中发挥重要作用。本研究将 C 基因起始密码子AUG 突变为ACG，并在氨基酸序列的第9位、第12位引入终止密码子，在V基因编码氨基酸序列的第7位、第285位、第294位引入三个终止密码子，运用PCR技术扩增获得了表达沉默的突变基因 ΔC 和ΔV，构建了真核表达载体p3flag-CMV-14-ΔC和p3flag-CMV-14-ΔV。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测表明转染突变基因质粒HEK-293T细胞中C基因 （P＜0.001）和V基因 （P＜0.01）表达均极显著降低，蛋白质印迹 （Western blot）检测表明转染突变基因质粒细胞中C蛋白和V蛋白均无表达。研究结果为进一步研究PPRV病毒C 和V蛋白的功能提供了科学依据。.