茶树 N-甲基转移酶基因启动子克隆及功能分析
茶树 N-甲基转移酶基因启动子克隆及功能分析
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DOI：
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发表时间：
2018
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
陈忠正
中科院分区：
文献类型：
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作者：
刘平;任秋婧;康馨;张媛媛;林晓蓉;李斌;高雄;陈忠正
咖啡碱是茶叶中重要的功能物质，N-甲基转移酶（NMT）是其生物合成的关键酶。本研究以英红 9 号.茶树新梢为材料，利用 hiTAIL-PCR 克隆 NMT1 基因启动子，并采用 Plant CARE 等在线软件分析其顺式作用.元件。根据其元件组成，设计 5'递减的启动子与 GUS 基因一起组建了融合载体转入烟草，利用 GUS 染色和定.量 PCR 方法，分析了克隆的启动子功能及其对环境因子的响应。结果表明，克隆的 NMT1 基因启动子长 767 bp，.含有 TATA-box、CAAT-box 等真核生物启动子基本元件及多个与植物非生物胁迫相关的响应元件。以 5'递减.的 NMT1 启动子替换 pBI121 中的 CaMV35S 启动子，构建出与 GUS 融合的 pA、pB、pC、pD 载体。在烟草.叶片中进行瞬时表达，不同长度的 NMT1 启动子均具驱动 GUS 表达功能，且长度越长驱动能力越强。以含全.长 NMT1 启动子载体 pA 对烟草转基因，转基因烟草各组织均检测到 GUS 基因的表达且表达量叶>茎>根，叶.片中的表达量为根部的 3 倍。对转基因烟草进行不同程度光照、温度、模拟干旱和脱落酸处理后，除 40℃温.度条件外，其他处理的叶片中 GUS 基因表达在处理前后均存在显著变化，表明 NMT1 启动子功能受外界环境.因子的胁迫影响。