Chemogenomic profiling of endogenous PARK2 expression using a genome-edited coincidence reporter.
Chemogenomic profiling of endogenous PARK2 expression using a genome-edited coincidence reporter.
复制标题
DOI：
10.1021/cb5010417
复制
发表时间：
2015-05-15
影响因子：
4
通讯作者：
Inglese J
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Hasson SA;Fogel AI;Wang C;MacArthur R;Guha R;Heman-Ackah S;Martin S;Youle RJ;Inglese J
Parkin是一种E3泛素连接酶，是线粒体质量控制的中心介质，与家族性帕金森病（PD）有关。通过帕金从细胞中去除功能障碍的线粒体被认为是神经保护性的，并且快速增加帕金水平可能是一种新的治疗方法。我们使用基因组编辑将重合报告基因整合到神经母细胞瘤衍生细胞系的PARK2基因位点中，并开发了一种定量高通量筛选（qHTS）试验，能够准确检测化合物介导的内源性PARK2表达的细微增加。化学基因组文库的查询揭示了上调PARK2转录物的多种化学类别，包括表观遗传剂、控制胆固醇生物合成的药物和JNK抑制剂。使用重合报告子消除了浪费的时间，从而消除了占活性物的约10%的有偏倚的假阳性，并且与基于滴定的筛选相结合，大大提高了化合物选择的效率。这种方法代表了一种振兴药物发现的基因检测的策略。
Parkin, an E3 ubiquitin ligase, is a central mediator of mitochondrial quality control and is linked to familial forms of Parkinson’s disease (PD). Removal of dysfunctional mitochondria from the cell by Parkin is thought to be neuroprotective, and pharmacologically increasing Parkin levels may be a novel therapeutic approach. We used genome editing to integrate a coincidence reporter into the PARK2 gene locus of a neuroblastoma-derived cell line, and developed a quantitative high-throughput screening (qHTS) assay capable of accurately detecting subtle compound-mediated increases in endogenous PARK2 expression. Interrogation of a chemogenomic library revealed diverse chemical classes that up-regulate PARK2 transcript, including epigenetic agents, drugs controlling cholesterol biosynthesis, and JNK inhibitors. Use of the coincidence reporter eliminated wasted time pursuing reporter-biased false positives accounting for ~⅔ of the actives, and coupled with titration-based screening greatly improves the efficiency of compound selection. This approach represents a strategy to revitalize reporter-gene assays for drug discovery.
登录
查看更多内容
选择性抑制BET溴结构域。
影响因子：
64.8
作者：
通讯作者：
--
影响因子：
3.7
作者：
Dranchak P;MacArthur R;Guha R;Zuercher WJ;Drewry DH;Auld DS;Inglese J
通讯作者：
Inglese J
影响因子：
5.7
作者：
Delcuve GP;Khan DH;Davie JR
通讯作者：
Davie JR
影响因子：
64.8
作者：
Huang, Hsien-Sung;Allen, John A.;Mabb, Angela M.;King, Ian F.;Miriyala, Jayalakshmi;Taylor-Blake, Bonnie;Sciaky, Noah;Dutton, J. Walter, Jr.;Lee, Hyeong-Min;Chen, Xin;Jin, Jian;Bridges, Arlene S.;Zylka, Mark J.;Roth, Bryan L.;Philpot, Benjamin D.
通讯作者：
Philpot, Benjamin D.
影响因子：
3.4
作者：
Benskey, Matthew;Lee, Ki Yong;Goudreau, John L.
通讯作者：
Goudreau, John L.