Use of mCherryOpt Fluorescent Protein in Clostridium difficile.
Use of mCherryOpt Fluorescent Protein in Clostridium difficile.
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mCherryOpt 荧光蛋白在艰难梭菌中的应用。
DOI：
10.1007/978-1-4939-6361-4_5
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发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Ellermeier,CraigD
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ransom,EricM;Weiss,DavidS;Ellermeier,CraigD
在这里，我们描述了使用红色荧光蛋白mCherryOpt在艰难梭菌的协议。该方案可以容易地适用于类似的荧光蛋白（FP），例如绿色荧光蛋白（GFP）和青色荧光蛋白（CFP）。在C中使用FP有三个关键的考虑因素。很难(1)选择正确的颜色：蓝色和（特别是）红色是首选，因为C。difficile显示出相当大的黄绿色自发荧光。(2)密码子优化：在一般循环中的大多数FP基因具有~ 60%的GC含量，因此它们在低GC细菌中不能很好地表达。(3)在暴露于O2之前固定厌氧生长的细胞：这里考虑的FP在厌氧产生时是无荧光的，因为O2需要将双键引入发色团。固定预防C.在细胞暴露于空气后，在发色团成熟所需的几个小时期间，细胞难以降解。对于维持细胞结构不重要的研究，固定可能可以省略，例如使用mCherryOpt监测基因表达。
Here we describe protocols for using the red fluorescent protein mCherryOpt inClostridium difficile. The protocols can be readily adapted to similar fluorescent proteins (FPs), such as green fluorescent protein (GFP) and cyan fluorescent protein (CFP). There are three critical considerations for using FPs inC. difficile. (1) Choosing the right color: Blue and (especially) red are preferred becauseC. difficileexhibits considerable yellow-green autofluorescence. (2) Codon optimization: Most FP genes in general circulation have a GC content of ~60 %, so they are not well expressed in low-GC bacteria. (3) Fixing anaerobically grown cells prior to exposure to O2: The FPs under consideration here are non-fluorescent when produced anaerobically because O2is required to introduce double bonds into the chromophore. Fixation preventsC. difficilecells from becoming degraded during the several hours required for chromophore maturation after cells are exposed to air. Fixation can probably be omitted for studies in which maintaining cellular architecture is not important, such as using mCherryOpt to monitor gene expression.
影响因子：
4.4
作者：
Drepper, Thomas;Huber, Robert;Jaeger, Karl-Erich
通讯作者：
Jaeger, Karl-Erich
抗生素抗性基因的起源、进化和传播。
DOI：
--
发表时间：
1987
期刊：
Microbiological sciences
影响因子：
--
作者：
P. Trieu;M. Arthur;P. Courvalin
通讯作者：
P. Courvalin
影响因子：
2.2
作者：
Heap, John T.;Pennington, Oliver J.;Minton, Nigel P.
通讯作者：
Minton, Nigel P.