羽衣甘蓝BoMAPK4原核表达、抗体制备及蛋白表达分析
羽衣甘蓝BoMAPK4原核表达、抗体制备及蛋白表达分析
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DOI：
10.7525/j.issn.1673-5102.2022.04.008
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发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
蓝兴国
中科院分区：
文献类型：
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作者：
栗赫铭;秦洪涛;魏德强;李旭;蓝兴国
以羽衣甘蓝(Brassica oleracea var.acephala)自交不亲和系(S13-bS13-b)为材料,提取柱头RNA,利用RTPCR分离羽衣甘蓝柱头丝裂原活化蛋白激酶4(MAPK4)基因。结果表明:获得的BoMAPK4 cDNA含有一个1 122 bp开放阅读框,编码373个氨基酸,具有丝氨酸/苏氨酸结构域,无信号肽和跨膜结构。羽衣甘蓝BoMAPK4与油菜(B.napus)BnMAPK4、芜菁(B.rapa)BrMAPK4、拟南芥(Arabidopsis thaliana)AtMAPK4的氨基酸序列一致性分别为99.7%、99.5%、95.4%。将BoMAPK4编码区的序列构建到原核表达载体pET-14b上,并转化到BL21(DE3)大肠杆菌(Escherichia coli)中进行原核表达。SDS-PAGE结果显示,在分子量大小约45 kDa处有BoMAPK4重组蛋白特异性表达。利用亲和层析的方法获得高纯度的重组BoMAPK4蛋白。利用获得的重组BoMAPK4蛋白免疫小鼠,制备BoMAPK4的多克隆抗体。提取羽衣甘蓝萼片、花瓣、花药、柱头、花柱和子房的总蛋白,利用免疫印迹的方法进行蛋白表达检测,结果发现BoMAPK4在花瓣、花药和子房中表达的较少,在萼片和花柱中表达的较多,在柱头中的表达量最高。这些研究为探讨BoMAPK4的生物学功能奠定了基础。