H9N2 亚型禽流感病毒 NS1 蛋白 原核表达载体的构建及表达
H9N2 亚型禽流感病毒 NS1 蛋白 原核表达载体的构建及表达
复制标题
DOI：
--
复制
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
刘青涛
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
马平;杨婧;刘宇卓;李银;黄欣梅;赵冬敏;韩凯凯;章丽娇;刘青涛
为对 H9N2 亚型禽流感病毒( AIVs) NS1 基因进行原核表达， 并对表达产物进行抗原性分析， 根据 NS1 基因.合成 1 对特异性引物， 进行 PCＲ 扩增， 将扩增片段连接至 PMD18 － T 载体， 通过序列测定和比对筛选出保真基因克.隆; 将保真基因克隆至 pET32a 表达载体， 构建重组质粒 pET32a － NS1 后转化至大肠杆菌 BL21( DE3) 中， 加入 IPTG 进.行诱导表达; 并对 IPTG 使用浓度和诱导时间进行优化， 对表达的重组蛋白用 His － tag 镍柱进行纯化， 利用 Western.Blot 和免疫荧光技术对纯化的重组蛋白进行鉴定及免疫原性的测定。结果显示， 本试验成功扩增出 H9N2 AIVs 的.NS1 基因， 并筛选到保真克隆; 带有 NS1 保真基因的重组载体 pET32a － NS1 可在大肠杆菌中进行 IPTG 诱导表达， 其.中， IPTG 最佳使用浓度为 2 mmol /L、最佳诱导时间为 8 h 时表达量最大， 并且表达产物主要存在于包涵体中; 纯化后.的重组蛋白可被抗 His 标签识别， 利用重组蛋白制备的抗体可识别 H9N2 AIVs 在细胞内表达的 NS1 蛋白， 说明重组蛋.白具有良好的免疫原性， 该试验为 H9N2 AIVs NS1 蛋白的功能特性和免疫学研究奠定了基础。