Isolation and detection of a KDEL-tagged recombinant cholera toxin B subunit from Nicotiana benthamiana.
Isolation and detection of a KDEL-tagged recombinant cholera toxin B subunit from Nicotiana benthamiana.
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DOI：
10.1016/j.procbio.2020.10.018
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发表时间：
2021-03
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Matoba N
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Morris DA;Reeves MA;Royal JM;Hamorsky KT;Matoba N
在这里，我们描述了分离和检测KDEL标记的植物产生的重组霍乱毒素B亚单位(CTB)的改进方法，该亚单位显示出独特的粘膜伤口愈合活性。该蛋白在本氏烟草中瞬时过表达，产生了一些C端KDEL截短的分子物种，这些分子物种缺乏上皮修复活性。用这里描述的一种新的CHT层析方法，这些产品衍生的杂质成功地从CTB中分离出来，并获得了完整的KDEL序列，如质谱学所证实的那样。此外，还建立了一种能够特异性检测具有完整KDEL序列的GM1神经节苷脂结合CTB的免疫分析方法。这些方法结合在一起，将有助于在植物性制造系统中生产的KDEL附着型CTB的质量控制，朝着治疗急性和慢性粘膜炎症的新型局部生物疗法迈进。
Here we describe refined methods for the isolation and detection of a KDEL-tagged, plant-produced recombinant cholera toxin B subunit (CTB) that exhibits unique mucosal wound healing activity. The protein was transiently overexpressed in Nicotiana benthamiana, which generates some C-terminal KDEL truncated molecular species that are deficient in epithelial repair activity. With a new CHT chromatographical method described herein, these product-derived impurities were successfully separated from CTB with the intact KDEL sequence, as confirmed by mass spectrometry. In addition, an immunoassay capable of specifically detecting GM1 ganglioside-binding CTB with intact KDEL sequences was developed. Coupled together, these methods will aid in the quality control of KDEL-attached CTB produced in plant-based manufacturing systems towards a novel topical biotherapeutic for the treatment of acute and chronic mucosal inflammation.
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