猪瘟野毒株与疫苗株双重TapMan实时定量PCR方法的建立与应用
猪瘟野毒株与疫苗株双重TapMan实时定量PCR方法的建立与应用
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DOI：
10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0207
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发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
景志忠
中科院分区：
文献类型：
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作者：
朱丽珂;房永祥;李皖豫;刘娟;高真贞;贾怀杰;何小兵;陈国华;娄忠子;李维克;景志忠
为实现对猪瘟野毒株与疫苗株之间的快速鉴别,本试验建立了一种猪瘟野毒株与疫苗株的双重TapMan实时定量PCR的检测方法。通过对GenBank公布的猪瘟病毒野毒株及疫苗株的全基因组序列进行比对和分析,设计出2对特异性引物及2条TapMan探针,经反应体系及反应条件优化后,对其特异性、稳定性及敏感性进行了验证。结果显示,本方法能特异性地对猪瘟野毒株及疫苗株进行鉴别检测,并且不与其他常见的猪源病毒产生交叉反应,组内和组间检测变异系数均小于1%,敏感性较普通RT-PCR分别高出100倍和1 000倍以上,且野毒株与疫苗株的最低检测下限分别在1.3 copies/L和1.58 copies/L。应用本方法对实验室保存的甘肃某猪场猪瘟活疫苗免疫前、后的56份已知背景的样本进行检测,结果,阳性符合率高达100%。本方法特异性强,稳定性和灵敏度高,不仅能够准确定量,并且可快速地对同一个样品中猪瘟病毒野毒株、疫苗毒株进行检测,为后续猪瘟净化效果的评估提供了新的技术手段。