Capillary isoelectric focusing with pH 9.7 cathode for the analysis of gastric biopsies.
Capillary isoelectric focusing with pH 9.7 cathode for the analysis of gastric biopsies.
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毛细血管等电聚焦，pH 9.7阴极用于分析胃活检。
DOI：
10.1007/s00216-011-4926-2
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发表时间：
2011-06
影响因子：
4.3
通讯作者：
Dovichi, Norman J.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ramsay, Lauren M.;Cermak, Nathan;Dada, Oluwatosin O.;Dovichi, Norman J.
关键词：
毛细管等电聚焦往往具有较差的重现性，特别是对于来自细胞或组织匀浆的复杂蛋白质样品的分析。这种较差的再现性似乎与电渗流的不稳定变化有关。电渗流变化的原因之一是动员和聚焦过程中常用的极碱性溶液导致毛细管涂层降解；通过使用 pH 值为 9 的 CAPS 动员缓冲液，可以减少毛细管涂层的这种降解。造成变化的另一个原因是毛细管壁上的蛋白质吸附，这会导致电渗流增加。通过在缓冲液中使用表面活性剂和采用极低的样品加载量可以减少蛋白质吸附的影响。我们报告了使用 CAPS 动员缓冲液与超灵敏激光诱导荧光检测器相结合，对巴雷特食管活检中约 2 ng 的蛋白质进行可重复分析。
Capillary isoelectric focusing tends to suffer from poor reproducibility, particularly for the analysis of complex protein samples from cellular or tissue homogenates. This poor reproducibility appears to be associated with erratic variations in electroosmotic flow. One cause of electroosmotic flow variation is degradation of the capillary coating caused by the extremely basic solution commonly used during mobilization and focusing; this degradation of the capillary coating can be reduced by employing a CAPS mobilization buffer at pH 9. Another cause of variation is protein adsorption to the capillary wall, which causes an increase in electroosmotic flow. The effects of protein adsorption can be reduced by use of surfactants in the buffer and by employing an extremely low sample loading. We report the use of CAPS mobilization buffer in combination with an ultrasensitive laser-induced fluorescence detector for the reproducible analysis of ~2 ng of protein from a Barrett’s esophagus biopsy.
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