Current SEM techniques for de‐ and re‐construction of centromeres to determine 3D CENH3 distribution in barley mitotic chromosomes
Current SEM techniques for de‐ and re‐construction of centromeres to determine 3D CENH3 distribution in barley mitotic chromosomes
复制标题
当前 SEM 技术用于着丝粒的脱除和重建，以确定大麦有丝分裂染色体中的 3D CENH3 分布
DOI：
10.1111/j.1365-2818.2011.03592.x
复制
发表时间：
2012
影响因子：
2
通讯作者：
Wanner
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Schroeder-Reiter;Houben;Wanner
结合光学显微镜（LM）和场发射扫描电子显微镜（FESEM）技术与FluoroNanogold标记，可以定量和高分辨率分析大麦有丝分裂染色体中着丝粒特异性组蛋白H3变体CENH 3的3D分布。使用荧光LM、常规FESEM、低压FESEM和FIB/FESEM组合技术研究染色体，进行前所未有的全面分析，以确定着丝粒中的染色质分布模式。使用来自染色体着丝粒区域的FIB/FESEM切片的数据，可以以迄今为止达到的最高分辨率呈现CENH 3分布的3D重建。来自每种方法的互补数据表明，CENH 3不仅定位于主缢痕，而且还定位于着丝粒间区域，并且仅分布在着丝粒的内部，而不是表面。这与理解动粒组装有关，并且偏离了当前的着丝粒结构模型。我们在这里强调这种广泛的显微镜方法，集中在技术方面的结合FESEM技术，其优点和局限性进行了讨论，提供了一个相关的例子，在着丝粒研究领域的应用调查的其他亚细胞生物结构。
Combined light microscopic (LM) and field emission scanning electron microscopic (FESEM) techniques with FluoroNanogold labelling allowed quantification and high resolution analysis of 3D distribution of the centromere‐specific histone H3 variant CENH3 in barley mitotic chromosomes. Chromosomes were investigated with fluorescence LM, conventional FESEM, low‐voltage FESEM and combined FIB/FESEM techniques for unprecedented comprehensive analysis to determine chromatin distribution patterns in the centromere. Using data from FIB/FESEM sectioning of centromeric regions of chromosomes, it was possible to render 3D reconstruction of the CENH3 distribution with highest resolution achieved to date. Complementary data derived from each approach show that CENH3 localizes not only to the primary constriction, but also in the pericentric regions and is distributed exclusively in the interior, rather than on the surface, of the centromere. This is relevant for understanding kinetochore assembly and digresses from current models of centromere structure. We emphasize here this broad microscopic approach, focusing on technical aspects of combined FESEM techniques, for which advantages and limitations are discussed, providing a relevant example—in the field of centromeric research—for application to investigations of other subcellular biological structures.
登录
查看更多内容
影响因子：
3
作者：
Schroeder-Reiter, Elizabeth;Perez-Willard, Fabian;Wanner, Gerhard
通讯作者：
Wanner, Gerhard
影响因子：
2.6
作者：
Manzanero, S;Rutten, T;Houben, A
通讯作者：
Houben, A
用于扫描电子显微镜的染色体免疫金标记：仔细观察大麦有丝分裂中期染色体中的磷酸化组蛋白 H3
影响因子：
2.6
作者：
E. Schroeder;Andreas Houben;Gerhard Wanner
通讯作者：
Gerhard Wanner
早期染色体凝聚的可视化
影响因子：
7.8
作者：
N. Kireeva;M. Lakonishok;I. Kireev;T. Hirano;A. Belmont
通讯作者：
A. Belmont
新的染色体模型
影响因子：
64.8
作者：
D. De
通讯作者：
D. De