Ligands Presumed to Label High Affinity and Low Affinity ATP Binding Sites Do Not Interact in an (αβ)2 Diprotomer in Duck Nasal Gland Na+,K+-ATPase, nor Do the Sites Coexist in Native Enzyme*
Ligands Presumed to Label High Affinity and Low Affinity ATP Binding Sites Do Not Interact in an (αβ)2 Diprotomer in Duck Nasal Gland Na+,K+-ATPase, nor Do the Sites Coexist in Native Enzyme*
复制标题
推测标记高亲和力和低亲和力 ATP 结合位点的配体不会与鸭鼻腺 Na+,K+-ATP 酶的 (αβ)2 二原体相互作用，这些位点也不会在天然酶中共存*
DOI：
--
复制
发表时间：
2000
影响因子：
4.8
通讯作者：
J. R. Sachs
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
D. Martin;J. R. Sachs
被认为是ATP类似物的配体与肾Na+，K+-ATP酶的相互作用表明，两个ATP结合位点共存于每个功能单元上。用荧光素5-异硫氰酸酯（FITC）标记高亲和性ATP位点，用2′（3′）-O-（2，4，6-三硝基苯基）腺苷5′-二磷酸（TNP-ADP）标记低亲和性位点的研究表明，这两个位点共存于同一αβ原体上。FITC标记高亲和力位点和赤藓红-5-异硫氰酸酯（ErITC）标记低亲和力位点的其他研究得出的结论是，在功能性双原体中，高亲和力位点和低亲和力位点存在于单独的相互作用的原体上。本文报道了在FITC对鸭鼻腺ATP酶活性的100%抑制作用下，鸭鼻腺酶的每个αβ原聚体都有一个单一结合的FITC。TNP-ADP和ErITC都与FITC结合的原聚体相互作用，这明确地表明，推定的高亲和力和低亲和力ATP位点共存于同一原聚体上。在未标记的鼻腺酶中，TNP-ADP和ErITC通过与具有高亲和力ATP结合位点特征的单个位点相互作用，抑制ATP酶活性和对硝基苯基磷酸酶活性，这两种功能分别归因于推定的高亲和力和低亲和力ATP位点。在FITC标记的酶中，TNP-ADP和ErITC抑制对硝基苯基磷酸酶活性，但浓度比未修饰的酶高得多。低亲和力位点不存在于未修饰的酶上，但只有在高亲和力位点被FITC修饰后才能检测到。
The interaction of ligands deemed to be ATP analogues with renal Na+,K+-ATPase suggests that two ATP binding sites coexist on each functional unit. Previous studies in which fluorescein 5-isothiocyanate (FITC) was used to label the high affinity ATP site and 2′(3′)-O-(2,4,6-trinitrophenyl)adenosine 5′-diphosphate (TNP-ADP) was used to probe the low affinity site suggested that the two sites coexist on the same αβ protomer. Other studies in which FITC labeled the high affinity site and erythrosin-5-isothiocyanate (ErITC) labeled the low affinity site led to the conclusion that the high and low affinity sites exist on separate interacting protomers in a functional diprotomer. We report here that at 100% inhibition of ATPase activity by FITC, each αβ protomer of duck nasal gland enzyme has a single bound FITC. Both TNP-ADP and ErITC interact with FITC-bound protomers, which unambiguously demonstrates that putative high and low affinity ATP sites coexist on the same protomer. In unlabeled nasal gland enzyme, TNP-ADP and ErITC inhibit both ATPase activity andp-nitrophenyl phosphatase activity, functions attributed to the putative high and low affinity ATP site, respectively, by interacting with a single site with characteristics of the high affinity ATP binding site. In FITC-labeled enzyme, TNP-ADP and ErITC inhibit p- nitrophenyl phosphatase activity but at much higher concentrations than with the unmodified enzyme. Low affinity sites do not exist on the unmodified enzyme but can be detected only after the high affinity site is modified by FITC.
登录
查看更多内容
通过 TNP-ADP 稳态荧光猝灭测量核苷酸与 IAF 标记的 Na /K( )-ATP 酶的结合。
影响因子：
3.8
作者：
Hellen,EH;Pratap,PR
通讯作者：
Pratap,PR
将脱卤素酶折叠建模为 Ca(2 )-ATPase 的 8-A 密度图，定义了新的结构域结构。
影响因子：
3.4
作者：
Stokes,DL;Green,NM
通讯作者：
Green,NM
具有接近最大比活性和磷酸化能力的Na,K-ATP酶的制备：反应机制涉及所有位点的证据。
DOI：
10.1021/bi983019b
发表时间：
1999
期刊：
Biochemistry.
影响因子：
--
作者：
Martin,DW;Sachs,JR
通讯作者：
Sachs,JR
磷酸盐和 TNP-ADP 同时与 FITC 修饰的 NA ,K( )-ATP 酶结合。
影响因子：
2.9
作者：
Scheiner-Bobis,G;Antonipillai,J;Farley,RA
通讯作者：
Farley,RA
（αβ）原体相互作用在确定红细胞 Na,K-ATP 酶功能特征中的作用。
DOI：
10.1016/0005-2736(94)90349-2
发表时间：
1994
期刊：
Biochimica et biophysica acta
影响因子：
--
作者：
Sachs,JR
通讯作者：
Sachs,JR