大鼠胚胎睾丸组织体外培养方法的建立
大鼠胚胎睾丸组织体外培养方法的建立
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DOI：
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发表时间：
2018
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
王子明
中科院分区：
文献类型：
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作者：
张同殿;张连栋;许丽丽;李和程;马玉波;吴治中;王子明
目的: 建立大鼠胚胎睾丸组织体外培养方法。方法: 取SPF 级性成熟( 体重200 ～ 250 g) SD 雄性.大鼠3 只、雌性6 只，根据阴道涂片判断雌鼠所属的发情时期，在其发情期及发情前期按照1∶2 合笼，发现精子则记.为怀孕0． 5 d( 0． 5 dpc) 。解剖显微镜下分离出15． 5 dpc 胚胎睾丸，一式2 份，1.份直接进行HE 染色，另1 份置于软.琼脂糖培养系统， 37 ℃、5% CO2.进行培养，分为对照组和hCG 组。培养当天为d0，倒置显微镜记录培养睾丸生长.情况，每天更换并收集d1、d2、d3、d4 培养液及d4 的睾丸组织。检测培养液睾酮浓度，培养结束后睾丸固定脱水包.埋进行组织学研究。结果: 应用阴道涂片方法可高效获得15． 5 dpc 大鼠，HE 染色提示能准确分离出15． 5 dpc.胚胎睾丸。倒置显微镜下可见培养睾丸发育良好，体积逐渐增大，生精小管逐渐增粗、迂曲、清晰。培养液中可检.测到睾酮，且睾酮浓度逐渐增高，d3 时达到峰值; hCG 可刺激睾酮分泌。HE 染色可见培养后睾丸组织结构完整，.无中央坏死现象发生，组织内有典型的生精小管，可见生殖母细胞、支持细胞及间质细胞; 透射电镜下可见生精小.管管腔中的生殖母细胞、支持细胞以及管腔外的间质细胞，细胞内的线粒体、内质网等细胞器，未见明显肿胀。.结论: 大鼠胚胎睾丸组织可在软琼脂糖培养系统中生长良好、保持活性，并向培养液中分泌睾酮。