构建肾小管上皮细胞衰老模型的研究
构建肾小管上皮细胞衰老模型的研究
复制标题
DOI：
10.3760/cma.j.issn.0254-9026.2021.10.008
复制
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
赵卫红
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
张宇;柏云;魏璐;张娟;赵卫红
目的运用不同药物诱导肾小管上皮细胞衰老模型并进行比较。方法分别用不同浓度D-半乳糖(D-gal)、过氧化氢(H_2O_2)、顺铂(CDDP)处理人近端肾小管上皮细胞系(HK2),采用CCK8法检测细胞活性及半数抑制浓度(IC_(50));衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色检测细胞衰老水平;蛋白免疫印迹法(western blotting)分析衰老相关基因表达;流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡。通过苏木精-伊红(HE)染色观察D-gal模型鼠和自然衰老鼠的肾小管及间质病理变化,免疫组化检测p16表达水平。结果CCK8结果显示,体外给予3种药物处理后HK2活性均受到抑制,48 h IC_(50)值分别为D-gal(365.8±9.7)mmol/L、H_2O_2 (385.4±20.8)µmol/L、CDDP(8.4±1.6)µmol/L。光镜下可见3组HK2细胞生长均减慢,且SA-β-gal阳性率较对照组均增加(P<0.05)。400 mmol/L D-gal和400 µmol/L H_2O_2处理后G0/G1期细胞较对照组分别增加(22.9±1.0) %和(13.0±4.4)%,而8 µmol/L CDDP组G2/M期细胞增加(14.4±1.9)% (t =48.07.6.40、16.53,均P<0.05)。与对照组,400 µmol/L H_2O_2和8 µmol/L CDDP处理后HK2凋亡分别增加(50.3±1.0)%和(41.9±2.0) %,明显高于400 mmol/L D-gal组(7.7±0.4)%(t =77.47、33.73、28.35,均P<0.05)。Western blotting结果提示3种药物达到一定浓度后,HK2细胞CCND1蛋白表达均下调。D-gal组p16表达上调(F =92.88,P<0.05),而H_2O_2和CDDP组p16的表达差异无统计学意义。实验结果显示,D-gal模型鼠可见与自然衰老鼠相似的肾小管上皮细胞数目减少、基底膜增厚、间质增宽,且肾小管上皮细胞p16表达增加。结论比较3种不同造模方式诱导的HK2衰老,D-gal诱导的肾小管上皮细胞衰老模型相对接近自然衰老。