Genetic engineering in primary human B cells with CRISPR-Cas9 ribonucleoproteins.
Genetic engineering in primary human B cells with CRISPR-Cas9 ribonucleoproteins.
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DOI：
10.1016/j.jim.2018.03.009
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发表时间：
2018-06
影响因子：
2.2
通讯作者：
Allen CDC
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Wu CM;Roth TL;Baglaenko Y;Ferri DM;Brauer P;Zuniga-Pflucker JC;Rosbe KW;Wither JE;Marson A;Allen CDC
用靶向核酸酶在人类细胞中进行基因组编辑现在能够实现多种实验性和治疗性基因组工程应用，但扩展到原代人类B细胞仍然有限。在这里，我们报告了一种在原代人B细胞中进行靶向基因工程的方法，该方法利用CRISPR-Cas9核糖核蛋白（RNP）的电穿孔在蛋白质编码基因座处以在某些情况下超过80%的高效率引入基因敲除突变。此外，我们证明了通过共递送用于同源性定向修复的寡核苷酸模板，靶向核苷酸的敲入编辑效率超过10%。我们在两种不同的体外培养系统中递送Cas9 RNP以在未分化的B细胞和经历分化的活化的B细胞中实现编辑，反映了在不同实验条件下的效用。总之，我们展示了一个强大的和可扩展的研究工具，人类B细胞生物学的功能遗传学研究，可能有进一步的应用工程B细胞治疗。
Genome editing in human cells with targeted nucleases now enables diverse experimental and therapeutic genome engineering applications, but extension to primary human B cells remains limited. Here we report a method for targeted genetic engineering in primary human B cells, utilizing electroporation of CRISPR-Cas9 ribonucleoproteins (RNPs) to introduce gene knockout mutations at protein-coding loci with high efficiencies that in some cases exceeded 80%. Further, we demonstrate knock-in editing of targeted nucleotides with efficiency exceeding 10% through co-delivery of oligonucleotide templates for homology directed repair. We delivered Cas9 RNPs in two distinct in vitro culture systems to achieve editing in both undifferentiated B cells and activated B cells undergoing differentiation, reflecting utility in diverse experimental conditions. In summary, we demonstrate a powerful and scalable research tool for functional genetic studies of human B cell biology that may have further applications in engineered B cell therapeutics.
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DOI：
10.1084/jem.20130323
发表时间：
2013-11-18
期刊：
The Journal of experimental medicine
影响因子：
--
作者：
Deenick EK;Avery DT;Chan A;Berglund LJ;Ives ML;Moens L;Stoddard JL;Bustamante J;Boisson-Dupuis S;Tsumura M;Kobayashi M;Arkwright PD;Averbuch D;Engelhard D;Roesler J;Peake J;Wong M;Adelstein S;Choo S;Smart JM;French MA;Fulcher DA;Cook MC;Picard C;Durandy A;Klein C;Holland SM;Uzel G;Casanova JL;Ma CS;Tangye SG
通讯作者：
Tangye SG
影响因子：
14.8
作者：
通讯作者：
--
DOI：
10.1056/nejmoa1707447
发表时间：
2017-12-28
期刊：
The New England journal of medicine
影响因子：
--
作者：
Neelapu SS;Locke FL;Bartlett NL;Lekakis LJ;Miklos DB;Jacobson CA;Braunschweig I;Oluwole OO;Siddiqi T;Lin Y;Timmerman JM;Stiff PJ;Friedberg JW;Flinn IW;Goy A;Hill BT;Smith MR;Deol A;Farooq U;McSweeney P;Munoz J;Avivi I;Castro JE;Westin JR;Chavez JC;Ghobadi A;Komanduri KV;Levy R;Jacobsen ED;Witzig TE;Reagan P;Bot A;Rossi J;Navale L;Jiang Y;Aycock J;Elias M;Chang D;Wiezorek J;Go WY
通讯作者：
Go WY
影响因子：
20.3
作者：
Oppermann, Sina;Ylanko, Jarkko;Andrews, David W.
通讯作者：
Andrews, David W.
DOI：
10.1073/pnas.1512503112
发表时间：
2015-08-18
影响因子：
11.1
作者：
Schumann, Kathrin;Lin, Steven;Marson, Alexander
通讯作者：
Marson, Alexander