Mass Spectrometric Assays Reveal Discrepancies in Inhibition Profiles for the SARS-CoV-2 Papain-Like Protease.
Mass Spectrometric Assays Reveal Discrepancies in Inhibition Profiles for the SARS-CoV-2 Papain-Like Protease.
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质谱分析显示SARS-CoV-2木瓜蛋白样蛋白酶的抑制谱存在差异。
DOI：
10.1002/cmdc.202200016
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发表时间：
2022-05-04
期刊：
影响因子：
3.4
通讯作者：
Schofield, Christopher J.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Brewitz, Lennart;Kamps, Jos J. A. G.;Lukacik, Petra;Strain-Damerell, Claire;Zhao, Yilin;Tumber, Anthony;Malla, Tika R.;Orville, Allen M.;Walsh, Martin A.;Schofield, Christopher J.
关键词：
两种SARS - CoV - 2蛋白酶，即主蛋白酶（Mpro）和木瓜蛋白酶样蛋白酶（PLpro）水解病毒多肽链，产生功能性非结构蛋白，是病毒复制所必需的，也是药物化学靶点。我们报道了一种基于高通量质谱（MS）的检测方法，可以直接监测PLpro在体外的催化作用。该实验用于研究报道的小分子PLpro抑制剂和选定的Mpro抑制剂对PLpro催化的影响。结果显示，一些，但不是全部，PLpro抑制剂的效力与使用基于荧光的测定法获得的结果有很大不同。一些与底物竞争的Mpro抑制剂，特别是处于临床开发中的PF - 07321332 (nirmatrelvir)，不抑制PLpro。选择性较低的Mpro抑制剂，例如；auranofin抑制PLpro，突出了双重PLpro/Mpro抑制的潜力。基于质谱的PLpro分析与广泛使用的基于荧光的分析是正交的，在验证抑制剂的效力方面是有用的，特别是对于通过非共价机制起作用的抑制剂。双重检查：基于质谱的直接SARS - CoV - 2 PLpro测定揭示了非共价抑制剂抑制谱的差异。使用正交试验建立基于荧光的分析是重要的开发高效的小分子PLpro抑制剂。
The two SARS‐CoV‐2 proteases, i. e. the main protease (Mpro) and the papain‐like protease (PLpro), which hydrolyze the viral polypeptide chain giving functional non‐structural proteins, are essential for viral replication and are medicinal chemistry targets. We report a high‐throughput mass spectrometry (MS)‐based assay which directly monitors PLpro catalysis in vitro. The assay was applied to investigate the effect of reported small‐molecule PLpro inhibitors and selected Mpro inhibitors on PLpro catalysis. The results reveal that some, but not all, PLpro inhibitor potencies differ substantially from those obtained using fluorescence‐based assays. Some substrate‐competing Mpro inhibitors, notably PF‐07321332 (nirmatrelvir) which is in clinical development, do not inhibit PLpro. Less selective Mpro inhibitors, e. g. auranofin, inhibit PLpro, highlighting the potential for dual PLpro/Mpro inhibition. MS‐based PLpro assays, which are orthogonal to widely employed fluorescence‐based assays, are of utility in validating inhibitor potencies, especially for inhibitors operating by non‐covalent mechanisms. Double check: A mass spectrometry‐based direct SARS‐CoV‐2 PLpro assay reveals discrepancies in inhibition profiles for non‐covalent inhibitors. Use of assays orthogonal to the established fluorescence‐based assays is important for development of efficient small‐molecule PLpro inhibitors.
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影响因子：
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Walsh MA