PCR primer design.
PCR primer design.
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DOI：
10.1101/pdb.ip65
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发表时间：
2009-03-01
影响因子：
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通讯作者：
Daniel, Saurabha
中科院分区：
文献类型：
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作者：
Apte, Arun;Daniel, Saurabha
聚合酶链式反应 (PCR) 的目的是扩增特定 DNA 片段，且不产生任何非特异性副产物。原则上，PCR 的每个物理和化学成分都可以进行修改，以潜在地提高产量、特异性或灵敏度。然而，成功 PCR 的最关键参数是最佳引物设计。即使所有其他参数均已正确优化，设计不当的引物也可能导致很少或没有产物，因为非特异性扩增和/或引物二聚体形成导致反应失败。本文提供了 PCR 引物设计的一般指南、为更复杂的应用开发引物对的技巧以及开发实时 PCR 探针的建议。
The objective of a polymerase chain reaction (PCR) is to amplify a specific DNA segment without any nonspecific by-products. In principle, each physical and chemical component of PCR can be modified to produce a potential increase in yield, specificity, or sensitivity. Yet the most critical parameter for successful PCR is optimal primer design. A poorly designed primer can result in little or no product, due to nonspecific amplification and/or primer-dimer formation leading to reaction failure, even when all the other parameters are properly optimized. This article provides general guidelines for PCR primer design, tips for development of primer pairs for more complex applications, and advice on the development of probes for real-time PCR.