巴马小型猪miR-183慢病毒载体的构建与鉴定
巴马小型猪miR-183慢病毒载体的构建与鉴定
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DOI：
10.13417/j.gab.040.002551
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发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
兰干球
中科院分区：
文献类型：
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作者：
张琰芳;黄叶;赵铭伟;綦文晶;司景磊;奉玲丽;莫家远;朱思燃;梁晶;兰干球
本研究的目的在于构建猪pLV-miR-183慢病毒表达载体并检测其在猪肾细胞(PK15)中的表达情况。以巴马小型猪基因组DNA为模板,利用PCR克隆miR-183前体及部分侧翼序列,并使用T4连接酶将其连入pLV-CMV-MCS-EF1载体,构建pLV-miR-183慢病毒表达载体。将PCR和测序鉴定为阳性的miR-183重组质粒转染PK15细胞,利用荧光倒置显微镜检测其转染效率。结果显示,miR-183扩增序列长度为329 bp,与参考序列一致。将阳性的pLV-miR-183重组质粒转染PK15细胞48 h后,在荧光显微镜下检测到较强的绿色荧光蛋白表达,并通过qRT-PCR验证其较高的表达水平,说明所构建的pLV-miR-183慢病毒载体在PK15细胞中具有较高的表达活性。本研究成功构建了猪miR-183慢病毒表达载体,为后续研究miR-183在疾病作用机制方面奠定了一定的理论基础。