Tropomodulin-binding site mapped to residues 7-14 at the N-terminal heptad repeats of tropomyosin isoform 5.
Tropomodulin-binding site mapped to residues 7-14 at the N-terminal heptad repeats of tropomyosin isoform 5.
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原调节蛋白结合位点定位于原肌球蛋白亚型 5 的 N 端七肽重复序列的残基 7-14。
DOI：
10.1006/abbi.2000.1802
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发表时间：
2000
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Sung,LA
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Vera,C;Sood,A;Gao,KM;Yee,LJ;Lin,JJ;Sung,LA
原调节蛋白是一种球状蛋白，通过与原肌球蛋白 (TM) 分子的 N 末端复合来覆盖肌动蛋白丝的尖端。 TM 由盘绕的线圈组成，但 N 末端除外，可能是球状的。在此，我们报告缺乏 N 端 18 个残基的人 TM 同工型 5 (hTM5) 失去了对原调节蛋白的结合活性。我们通过在该区域内创建一系列缺失和错义突变，然后进行固相结合测定，进一步表征了原调节蛋白结合位点。 I7、V10 和 I14 是位于涉及缠绕的 N 端七肽重复序列 a 和 d 位置的疏水残基，对于原调节蛋白结合至关重要。 R12 是 f 位带正电的残基，也参与识别。相比之下，A2R 和 G3Y 突变均产生了庞大的 N 末端，但并未改变结合。此外，大鼠 TM5b 与 hTM5 的不同之处在于残基 4-6，表现出相似的结合亲和力。因此，原调节蛋白结合位点被映射到长七肽重复序列开头的残基 7-14。柱色谱显示hTM5突变体仍然能够二聚化。结果还表明原调节蛋白具有凹槽型而不是空腔型的 hTM5 结合位点。我们还将单克隆抗体 LC1 的表位映射到 hTM5 的残基 4-10，并显示了 mAb LC1 和原调节蛋白在 hTM5 结合中的竞争。由于 N 端残基在头尾关联中需要与 TM 的 C 端重叠，因此本研究阐明了原调节蛋白-hTM5 复合物的形成机制以及在调节肌动蛋白丝中发挥作用的机制。
Tropomodulin is a globular protein that caps the pointed end of actin filaments by complexing with the N-terminus of a tropomyosin (TM) molecule. TM consists of coiled coils except for the N-terminus, which may be globular. Here we report that human TM isoform 5 (hTM5) lacking the N-terminal 18 residues lost its binding activity toward tropomodulin. We further characterized the tropomodulin-binding site by creating a series of deletion and missense mutations within this region, followed by a solid-phase binding assay. I7, V10, and I14, hydrophobic residues located at the a and d positions of N-terminal heptad repeats involving intertwine, are essential for tropomodulin binding. R12, a positively charged residue at the f position, is also involved in recognition. In contrast, A2R and G3Y mutations, each creating a bulky N-terminus, did not alter the binding. In addition, rat TM5b, which differs from hTM5 in residues 4–6, exhibits a similar binding affinity. The tropomodulin-binding site, therefore, is mapped to residues 7–14 at the beginning of the long heptad repeats. Column chromatography revealed that hTM5 mutants remained capable of dimerization. Results also suggest tropomodulin has a groove-type, rather than a cavity-type, binding site for hTM5. We also mapped the epitope of monoclonal antibody LC1 to residues 4–10 of hTM5 and showed the competition between mAb LC1 and tropomodulin in hTM5 binding. Since the N-terminal residues need to overlap with the C-terminus of TM in their head-to-tail association, this investigation elucidates the mechanisms by which the tropomodulin–hTM5 complex is formed and functions in regulating the actin filaments.
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DOI：
10.1016/s0021-9258(18)45276-3
发表时间：
1987-09
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
V. Fowler
通讯作者：
V. Fowler
影响因子：
4.4
作者：
L. Sung;Y. Fan;C. Lin
通讯作者：
L. Sung;Y. Fan;C. Lin
DOI：
10.1016/s0021-9258(18)95981-8
发表时间：
1967-05
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
D. G. Hoare;D. Koshland
通讯作者：
D. G. Hoare;D. Koshland
低分子量大鼠成纤维细胞原肌球蛋白 5 (TM-5)：cDNA 克隆、肌动蛋白结合、定位和卷曲螺旋相互作用。
DOI：
10.1002/(sici)1097-0169(1996)33:3
发表时间：
1996
期刊：
Cell motility and the cytoskeleton.
影响因子：
--
作者：
Temm-Grove,CJ;Guo,W;Helfman,DM
通讯作者：
Helfman,DM
α-蛋白质中的旋光性和螺旋多肽链构型
DOI：
--
发表时间：
1957
期刊：
影响因子：
--
作者：
C. Cohen;A. Szent
通讯作者：
A. Szent