The ionic liquid isopropylammonium formate as a mobile phase modifier to improve protein stability during reversed phase liquid chromatography.
The ionic liquid isopropylammonium formate as a mobile phase modifier to improve protein stability during reversed phase liquid chromatography.
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DOI：
10.1016/j.jchromb.2013.08.005
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发表时间：
2013-12-01
影响因子：
3
通讯作者：
Danielson, Neil D.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Zhou, Ling;Danielson, Neil D.
研究了室温离子液体甲酸异丙基铵（IPAF）作为反相高效液相色谱（HPLC）移动的相改性剂用于使用聚合物柱分离天然蛋白质，并将该蛋白质稳定性与使用乙腈（MeCN）作为标准有机移动的相改性剂的蛋白质稳定性进行了比较。研究了具有不同数量亚基的各种重要蛋白质，包括非亚基蛋白质：白蛋白和淀粉葡糖苷酶（AMY）;两个亚基蛋白质：甲状腺球蛋白（THY）;和四个亚基蛋白质：谷氨酸脱氢酶（GDH）和乳酸脱氢酶（LDH）。使用IPAF作为移动的相改性剂后，在色谱图中观察到蛋白质稳定性的显著增强。在约2分钟处的第一个较尖锐的峰代表主要为天然形式的蛋白质，并且在约5-6分钟处更多保留的第二个较宽的峰代表基本上变性或可能聚集的蛋白质。所研究的蛋白质（除LDH）可以在高达50%IPAF内保持天然形式，而具有低至10%MeCN的移动的相诱导蛋白质变性。使用LDH的丙酮酸测定进一步表明，与使用30%MeCN没有活性相比，在水中高达30%IPAF可以保持酶活性。
The room temperature ionic liquid isopropylammonium formate (IPAF) is studied as a reversed phase HPLC mobile phase modifier for separation of native proteins using a polymeric column and this protein stability is compared to that using acetonitrile (MeCN) as the standard organic mobile phase modifier. A variety of important proteins with different numbers of subunits is investigated, including non-subunit proteins: albumin, and amyloglucosidase (AMY); a two subunit protein: thyroglobulin (THY); and four subunit proteins: glutamate dehydrogenase (GDH) and lactate dehydrogenase (LDH). A significant enhancement in protein stability is observed in the chromatograms upon using IPAF as a mobile phase modifier. The first sharper peak at about 2 min represented protein in primarily the native form and a second broader peak more retained at about 5–6 min represented substantially denatured or possibly aggregated protein. The investigated proteins (except LDH) could maintain the native form within up to 50% IPAF, while a mobile phase, with as low as 10% MeCN, induced protein denaturation. The assay for pyruvate using LDH has further shown that enzymatic activity can be maintained up to 30% IPAF in water in contrast to no activity using 30% MeCN.
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DOI：
10.1016/j.jchromb.2006.10.068
发表时间：
2007-04-15
期刊：
Journal of chromatography. B, Analytical technologies in the biomedical and life sciences
影响因子：
--
作者：
Geng X;Wang C
通讯作者：
Wang C
影响因子：
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作者：
Fekete, Szabolcs;Berky, Robert;Guillarme, Davy
通讯作者：
Guillarme, Davy
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影响因子：
3.2
作者：
Guo, Zheng;Chen, Biqiang;Xu, Xuebing
通讯作者：
Xu, Xuebing
DOI：
10.1016/j.chroma.2008.09.064
发表时间：
2009-04-17
期刊：
Journal of chromatography. A
影响因子：
--
作者：
Grossman S;Danielson ND
通讯作者：
Danielson ND
影响因子：
7.4
作者：
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通讯作者：
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