吡咯并喹啉醌对氧化应激条件下大鼠骨髓间充质干细胞线粒体功能和细胞存活的影响及机制
吡咯并喹啉醌对氧化应激条件下大鼠骨髓间充质干细胞线粒体功能和细胞存活的影响及机制
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DOI：
10.3760/cma.j.cn501120-20190806-00335
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发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
胡大海
中科院分区：
文献类型：
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作者：
王许杰;杨云舒;沈括;王璟;韩夫;吴高峰;李艳;白晓智;罗亮;胡大海
目的观察吡咯并喹啉醌(PQQ)在氧化应激条件下对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)线粒体功能和细胞存活的影响,并探讨其作用机制.方法体外用含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12培养基(下称正常培养基)培养大鼠BMSC,选取对数生长期的第3 ~5代细胞进行实验.(1)取细胞,分为正常对照组、正常对照+ PQQ组、单纯过氧化氢组、过氧化氢+ PQQ组.正常对照组细胞用正常培养基培养24 h;正常对照+ PQQ组细胞用含终物质的量浓度为100 µmol/L PQQ的正常培养基培养24 h;单纯过氧化氢组细胞用含有终物质的量浓度为200 µmol/L过氧化氢的正常培养基培养24 h;过氧化氢+ PQQ组细胞用含有终物质的量浓度为100 µmol/L PQQ的正常培养基培养2 h后,加入终物质的量浓度为200 µmol/L的过氧化氢培养24 h.于倒置相差显微镜下观察各组细胞形态,采用细胞计数试剂盒8法检测细胞存活率.(2)取5个批次细胞,均分为正常对照组、单纯过氧化氢组、过氧化氢+ PQQ组,各组细胞处理同实验(1)中相应各组.培养24 h后,采用流式细胞术对1个批次细胞进行细胞凋亡检测,计算细胞凋亡率;采用JC-1线粒体膜电位检测试剂盒和倒置相差荧光显微镜对1个批次细胞分别进行线粒体膜电位检测和JC-1荧光染色观察;采用透射电镜观察1个批次细胞线粒体形态;采用过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性测定试剂盒对1个批次细胞分别进行CAT和SOD活性检测;采用蛋白质印迹法对1个批次细胞环磷酸腺苷活化交换蛋白1 (Epacl)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK、剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、caspase-3蛋白表达进行检测,计算AMPK磷酸化水平、剪切型caspase-3/caspase-3比值.除形态观察外,其余各指标每组样本数均为6.对数据行单因素方差分析、独立样本等方差t检验.结果(1)培养24 h后,单纯过氧化氢组细胞出现空泡且数量较正常对照组减少,细胞存活率为(74.3 ± 2.9)%,较正常对照组的100.0%明显降低(t =6.39, P 0.05).(2)培养24h后,与正常对照组的(13.6 ±1.0)%比较,单纯过氧化氢组细胞凋亡率明显增加[(37.1 ±2.0)%,t = 10.57, P 0.05).(6)培养24 h后,与正常对照组比较,单纯过氧化氢组细胞Epacl蛋白表达明显降低(t =4.67, P <0.01),AMPK磷酸化水平、剪切型caspase-3/caspase-3比值明显升高(t =7.88、3.62,P <0.01);与单纯过氧化氢组比较,过氧化氢+ PQQ组细胞Epacl蛋白表达、AMPK磷酸化水平均明显升高(t =4.34、16.37, P <0.01),剪切型caspase-3/caspase-3比值明显降低(t =3.17,P < 0.05).结论PQQ预处理能够改善氧化应激条件下大鼠BMSC的线粒体功能,降低细胞凋亡率,提高细胞存活率,且可能与Epacl蛋白表达上调、AMPK信号通路激活和剪切型caspase-3蛋白水平降低有关.