Quantitation of pyrimidine dimer contents of nonradioactive deoxyribonucleic acid by electrophoresis in alkaline agarose gels.
Quantitation of pyrimidine dimer contents of nonradioactive deoxyribonucleic acid by electrophoresis in alkaline agarose gels.
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通过碱性琼脂糖凝胶电泳定量非放射性脱氧核糖核酸的嘧啶二聚体含量。
DOI：
10.1021/bi00273a006
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发表时间：
1983
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
Shih,AG
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Sutherland,BM;Shih,AG
材料与方法噬菌体。从F. W.布鲁克海文国家实验室研究，并在大肠杆菌AB 2500上生长。通过将噬菌体稀释液和0.2 mL E.大肠杆菌在2 mL软琼脂（10 g胰蛋白胨、5 g NaCl和7 g细菌琼脂/L）中在硬琼脂基质（10 g胰蛋白胨、5 g NaCl和10 g细菌琼脂/L）上进行。将板在室温下孵育过夜。辐照将纯化的噬菌体在50 mM三（羟甲基）氨基甲烷（Tris）（pH 8）和200 mM NaCl中稀释至3.2 × 1010/mL。在不断搅拌下，将两毫升样品暴露于约翰斯单色仪（Johns & Rauth，1965）的单色辐射下;用硅光电二极管监测入射光。各种波长（以纳米计）的入射强度（以光子每秒计）如下：248，1.29 X 1014; 265，1.89 X 1014; 280，1.84 X 1014; 289，4.48 X 1014; 297，1.76 X 1015; 313，2.44 X 1016。在313 nm处的辐照和强度测量是通过薄Mylar滤光片过滤以排除较短波长的光。
Materials and MethodsBacteriophage. T7 bacteriophage were obtained from F. W. Studier, Brookhaven National Laboratory, and grown on Escherichia coli AB2500. Viable virus titer was determined by plating a dilution of phage and 0.2 mL of E. coli in 2 mL of soft agar (10 g of Bactotryptone, 5 g of NaCl, and 7 g of Bacto Agar per L) over a hard agar base (10 g of tryptone, 5 g of NaCl, and 10 g of Bacto Agar per L). Plates were incubated overnight at room temperature. Irradiation. Purified phage were diluted to 3.2 X 1010/mL in 50 mM tris (hydroxymethyl) aminomethane (Tris), pH 8, and 200 mM NaCl. Two-milliliter samples were exposed with constant stirring to monochromaticradiation from a Johns’ monochromator (Johns & Rauth, 1965); incident light was monitored with a silicon photodiode. Incident intensities (in photons per second) for the various wavelengths (in nanom-eters) were the following: 248, 1.29 X 1014; 265, 1.89 X 1014; 280, 1.84 X 1014; 289, 4.48 X 1014; 297, 1.76 X 1015; 313, 2.44 X 1016. Irradiations and intensity measurements at 313 nm were of light filtered through a thin Mylar filter to exclude shorter wavelengths.
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--
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