与鸡斑点型锌指结构蛋白互作的细胞蛋白筛选及其功能分析
与鸡斑点型锌指结构蛋白互作的细胞蛋白筛选及其功能分析
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DOI：
10.3969/j.issn.1674-7968.2022.05.012
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发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
段志强
中科院分区：
文献类型：
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作者：
王燕碧;赵采芹;唐宏;周磊;韩一帆;邢静如;石海英;段志强
斑点型锌指结构蛋白(speckle-type POZ (pox virus and zinc finger protein)protein, SPOP)是E3泛素连接酶Cullin 3家族中的一员,通过与底物蛋白的互作促进底物的泛素化和降解,从而影响底物蛋白的生物学功能。本研究构建了鸡(Gallus gallus)SPOP基因的重组真核表达载体pCMV-HA-SPOP,并将其和空载体pCMV-HA分别转染鸡胚成纤维细胞系(DF-1),提取细胞总蛋白,利用免疫共沉淀(coimmunoprecipitation, Co-IP)联合质谱分析技术筛选和鉴定与鸡SPOP蛋白互作的细胞蛋白,并对其进行基因本体(Gene Ontology, GO)功能注释、KEGG信号通路和蛋白互作网络分析。进一步利用荧光共定位和Co-IP实验,对鸡SPOP蛋白和筛选的细胞蛋白26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基11 (26S proteasome non ATPase regulatory subunit 11, PSMD11)进行相互作用验证。结果显示,重组蛋白HA-SPOP在细胞内得到正确表达,并且主要定位在细胞核和细胞质。利用Co-IP联合质谱分析技术共筛选到158个与鸡SPOP蛋白相互作用的细胞蛋白,主要分布在细胞核、细胞骨架和细胞质,参与了酶活性、核酸结合和蛋白质加工等生物学过程及代谢、核糖体组成和生物调节等信号通路。蛋白互作网络图分析发现,与鸡SPOP蛋白互作的细胞蛋白之间存在复杂的相互作用网络,其中蛋白酶体激活物复合物亚单位3 (proteasome activator complex subunit 3, PSME3)、PSMD11和H2A组蛋白家族成员Z (H2A histone family, member Z, H2AFZ)3个蛋白可能与鸡SPOP蛋白具有直接的相互作用。荧光共定位和Co-IP实验结果表明,鸡SPOP蛋白与PSMD11蛋白存在相互作用,并且可以改变PMSD11蛋白的细胞内定位。本研究为进一步探究鸡SPOP蛋白在细胞内的生物学功能提供参考。