抗间质上皮转化因子(c-Met)单价抗体的制备及生物学活性检测
抗间质上皮转化因子(c-Met)单价抗体的制备及生物学活性检测
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DOI：
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发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
房健民
中科院分区：
文献类型：
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作者：
郭佳;蒋明;靳令经;尹衍新;孙慧;于丽华;毛玉婷;房健民
目的用抗人间质上皮转化因子（c-Met）阻断型嵌合抗体ch3E1D7表达质粒构建单价抗体慢病毒穿梭质粒,利用慢病毒表达系统实现其在HEK293T细胞中快速表达,并对纯化后抗体的亲和力及中和活性进行检测。方法设计抗c-Met的单价抗体,命名为mono3E1D7,利用基因工程技术构建单价抗体三条链的慢病毒表达载体,磷酸钙法转染HEK293T细胞,表达的单价抗体经蛋白A琼脂糖4B亲和层析柱纯化,SDS-PAGE检测抗体完整性,ELISA检测单价抗体在体外阻断c-Met与其配体HGF结合的生物学活性。结果感染单价抗体慢病毒的HEK293T细胞上清纯化后,SDS-PAGE分析可见55 ku的重链、25 ku的轻链以及30 ku的杵状结构链（Knob）三条带。且纯化后的单价抗体能与c-Met抗原结合,同时还具有阻断c-Met与HGF结合的中和活性。结论成功获得抗人c-Met阻断型单价抗体。