Molecular characterization of Sin3 PAH-domain interactor specificity and identification of PAH partners.
Molecular characterization of Sin3 PAH-domain interactor specificity and identification of PAH partners.
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SIN3 PAH域相互作用的特异性和PAH伴侣的鉴定的分子表征。
DOI：
10.1093/nar/gkl537
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发表时间：
2006
影响因子：
14.9
通讯作者：
Stunnenberg, Hendrik G.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Le Guezennec, Xavier;Vermeulen, Michiel;Stunnenberg, Hendrik G.
Sin 3是多亚基共阻遏物复合物的中心组分。许多DNA结合蛋白通过与其配对的两亲性螺旋（PAH）结构域结合而被Sin 3复合物靶向染色质。在这里，我们进行了酵母双杂交筛选，使用肽适体库和确定的肽与PAH 1或PAH 2相互作用。PAH 2相互作用肽的分析揭示了类似于先前表征的PAH 2相互作用蛋白，Mad，Ume 6和kruppel样成员的基序，而PAH 1相互作用肽的分析揭示了LXXLL基序。此外，串联亲和纯化（TAP）的Sin 3b标签的方法导致在已知的和新的相互作用，其中神经视网膜亮氨酸（NRL）拉链的分离。引人注目的是，鉴定的PAH 2相互作用肽之一显示出与NRL区域氨基酸125-150的强烈相似性。PAH 2和NRL之间的直接关联被显示，并且在报告基因测定中NRL（125-150）介导转录抑制。最后，我们揭示了PAH 1和PAH 2的氨基酸7，14和39先前被证明是重要的Mad-PAH 2的相互作用，也发挥了重要作用的特异性之间的相互作用的PAH 1，PAH 2和识别的适体。我们的研究结果提供了新的见解的分子决定因素的特异性PAH 1和PAH 2的相互作用的合作伙伴。
Sin3 is the central component of a multisubunit co-repressor complex. A number of DNA-binding proteins are targeted by the Sin3 complex to chromatin through association with its paired amphipathic helix (PAH) domains. Here, we performed a yeast two-hybrid screening using a peptide aptamer library and identified peptides that interact with either PAH1 or PAH2. Analysis of PAH2 interacting peptides uncovered motifs similar to previously characterized PAH2 interacting proteins, Mad, Ume6 and kruppel-like members, while analysis of PAH1 interacting peptides revealed an LXXLL motif. In addition, a tandem affinity purification (TAP)-tagging approach of Sin3b resulted in the isolation of known and novel interactors amongst which neural retina leucine (NRL) zipper. Strikingly, one of the identified PAH2 interacting peptide showed strong resemblance to the NRL region amino acids 125–150. Direct association between PAH2 and NRL was shown and NRL(125–150) mediated transcriptional repression in reporter assays. Finally, we reveal that PAH1 and PAH2 amino acids 7, 14 and 39 shown previously to be important for Mad–PAH2 interaction, also play an important role in the specificity of interaction between PAH1, PAH2 and identified aptamers. Our results provide novel insights into the molecular determinant of the specificity of PAH1 and PAH2 for their interacting partners.
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