Dynamics of Loading the β Sliding Clamp of DNA Polymerase III onto DNA*
Dynamics of Loading the β Sliding Clamp of DNA Polymerase III onto DNA*
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将 DNA 聚合酶 III 的 β 滑动夹加载到 DNA 上的动力学*
DOI：
--
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发表时间：
1996
影响因子：
4.8
通讯作者：
M. Goodman
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
L. Bloom;J. Turner;Z. Kelman;J. Beechem;M. O’Donnell;M. Goodman
一个“最小”DNA引物-模板系统，由80-mer模板和30-mer引物组成，支持DNA聚合酶III核心在β滑动夹、γ复合物夹加载器和大肠杆菌单链结合蛋白存在下进行DNA合成。该引物-模板系统用于测量atp依赖反应中γ络合物对β滑动钳的负载。通过监测DNA的荧光去极化检测结合蛋白-DNA复合物。测量了稳态和时间分辨各向异性，停止流动的稳态前荧光测量允许实时可视化加载反应。将β加载到DNA上的速度为12 s−1，表明钳形组装在滞后链Okazaki片段合成所需的时间尺度上是快速的。结合速率似乎受到在钳载反应之前发生的分子内步骤的限制，可能是环形β二聚体的打开。
A “minimal” DNA primer-template system, consisting of an 80-mer template and 30-mer primer, supports processive DNA synthesis by DNA polymerase III core in the presence of the β sliding clamp, γ complex clamp loader, and single-stranded binding protein from Escherichia coli. This primer-template system was used to measure the loading of the β sliding clamp by the γ complex in an ATP-dependent reaction. Bound protein-DNA complexes were detected by monitoring fluorescence depolarization of DNA. Steady state and time-resolved anisotropies were measured, and stopped-flow pre-steady state fluorescence measurements allowed visualization of the loading reactions in real time. The rate of loading β onto DNA was 12 s−1, demonstrating that clamp assembly is rapid on the time scale required for lagging strand Okazaki fragment synthesis. The association rate appears to be limited by an intramolecular step occurring prior to the clamp-loading reaction, possibly the opening of the toroidal β dimer.
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通过荧光总强度和各向异性停流动力学实验的结合来解决多相反应。
影响因子：
3.4
作者：
Otto,MR;Lillo,MP;Beechem,JM
通讯作者：
Beechem,JM
DOI：
10.1016/s0021-9258(18)99166-0
发表时间：
1991-06
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
P. Stukenberg;P. S. Studwell-Vaughan;M. O’Donnell
通讯作者：
P. Stukenberg;P. S. Studwell-Vaughan;M. O’Donnell
DNA聚合酶III全酶的孪生聚合酶的构成。
DOI：
--
发表时间：
1991
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Studwell-Vaughan,PS;O'Donnell,M
通讯作者：
O'Donnell,M
影响因子：
2.9
作者：
LETILLY, V;ROYER, CA
通讯作者：
ROYER, CA
DNA 聚合酶 III 辅助蛋白。
DOI：
--
发表时间：
1993
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Studwell-Vaughan,PS;O'Donnell,M
通讯作者：
O'Donnell,M