Aequorin mutants with increased thermostability.
Aequorin mutants with increased thermostability.
复制标题
具有增加恒温性的Aquorin突变体。
DOI：
10.1007/s00216-014-8039-6
复制
发表时间：
2014-09
影响因子：
4.3
通讯作者：
Daunert, Sylvia
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Qu, Xiaoge;Rowe, Laura;Dikici, Emre;Ensor, Mark;Daunert, Sylvia
由于细胞和大多数动物中可忽略的生物发光背景，以及生物发光报告系统的无毒性，生物发光标记可特别用于体内和活体动物研究。然而，由于许多基于生物发光的研究的纵向性质和生理温度条件，生物发光标记的显著热稳定性是必不可少的。为了提高发光蛋白水母发光蛋白的热稳定性，我们采用随机和合理的诱变策略，创建两个热稳定的双突变体，S32 T/E156 V和M36 I/E146 K，和一个特别热稳定的四重突变体，S32 T/E156 V/Q168 R/L170 I。在37 ° C的热稳定性研究期间，双水母发光蛋白突变体S32T/E156V和M36I/E146K保留了比野生型水母发光蛋白多4倍和2.75倍的初始生物发光活性。此外，四重水母发光蛋白突变体，S32 T/E156 V/Q168 R/L170 I，在各种温度下比单独的双突变体表现出更高的热稳定性，产生迄今为止鉴定的最热稳定的水母发光蛋白突变体。
Bioluminescent labels can be especially useful for in vivo and live animal studies due to the negligible bioluminescence background in cells and most animals, and the non-toxicity of bioluminescent reporter systems. Significant thermal stability of bioluminescent labels is essential, however, due to the longitudinal nature and physiological temperature conditions of many bioluminescent based studies. To improve the thermostability of the bioluminescent protein aequorin we employed random and rational mutagenesis strategies to create two thermostable double mutants, S32T/E156V and M36I/E146K, and a particularly thermostable quadruple mutant, S32T/E156V/Q168R/L170I. The double aequorin mutants, S32T/E156V and M36I/E146K, retained 4 and 2.75 times more of their initial bioluminescence activity than wild type aequorin during thermostability studies at 37 °C. Moreover, the quadruple aequorin mutant, S32T/E156V/Q168R/L170I, exhibited more thermostability at a variety of temperatures than either double mutant alone, producing the most thermostable aequorin mutant identified thus far.
登录
查看更多内容
影响因子：
3.5
作者：
OHMIYA, Y;TSUJI, FI
通讯作者：
TSUJI, FI
影响因子：
3.5
作者：
TANAHASHI, H;ITO, T;SAKAKI, Y
通讯作者：
SAKAKI, Y
影响因子：
4.8
作者：
Tsuzuki, K;Tricoire, L;Lambolez, B
通讯作者：
Lambolez, B
影响因子：
4.1
作者：
WATKINS, NJ;CAMPBELL, AK
通讯作者：
CAMPBELL, AK
影响因子：
2.4
作者：
Koksharov, Mikhail I.;Ugarova, Natalia N.
通讯作者：
Ugarova, Natalia N.