Structural characterization of the complex of SecB and metallothionein-labeled proOmpA by cryo-electron microscopy.
Structural characterization of the complex of SecB and metallothionein-labeled proOmpA by cryo-electron microscopy.
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通过冷冻电子显微镜对 SecB 和金属硫蛋白标记的 proOmpA 复合物进行结构表征
DOI：
10.1371/journal.pone.0047015
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发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Sui SF
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Zhou Q;Sun S;Tai P;Sui SF
ProOmpA 是一种前蛋白，在大肠杆菌中通过一般分泌途径跨质膜转运。 Sec 通路中的分子伴侣 SecB 可以识别并结合 proOmpA 进行易位。然而，SecB/proOmpA 复合物的结构仍然未知。在这里，我们构建了一个在 C 末端与金属硫蛋白融合的不可切割的 proOmpA，并在体外用金属对其进行标记，用于冷冻电子显微镜的研究。使用单粒子冷冻电子显微镜，我们重建了稳定的 SecB/proOmpA 复合物的 3D 结构。该结构表明前蛋白的主要部分位于 SecB 四聚体的一侧，导致不对称的结合模式。这项工作还提供了一种通过冷冻电子显微镜测定小蛋白质复合物结构的可能方法。
ProOmpA is a preprotein that is translocated across the plasma membrane by the general secretory pathway in Escherichia coli. The molecular chaperon SecB in Sec pathway can recognize and bind proOmpA for its translocation. However, the structure of the SecB/proOmpA complex remains unknown. Here, we constructed an uncleavable proOmpA fused with metallothionein at its C-terminus and labeled it with metals in vitro for the study of cryo-electron microscopy. Using single particle cryo-electron microscopy, we reconstructed 3D structure of the stable SecB/proOmpA complex. The structure shows that the major portion of preprotein locates on one side of SecB tetramer, resulting in an asymmetric binding pattern. This work also provides a possible approach to the structure determination of small protein complexes by cryo-electron microscopy.
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