Site-specific encoding of photoactivity and photoreactivity into antibody fragments.
Site-specific encoding of photoactivity and photoreactivity into antibody fragments.
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DOI：
10.1038/s41589-022-01251-9
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发表时间：
2023-06
影响因子：
14.8
通讯作者：
Sachdeva, Amit
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Bridge, Thomas;Wegmann, Udo;Crack, Jason C. C.;Orman, Kate;Shaikh, Saher A. A.;Farndon, William;Martins, Carlo;Saalbach, Gerhard;Sachdeva, Amit
设计响应于光而执行两种或更多种不同功能的生物分子仍然具有挑战性。在这里，我们已经引入了并发的光活性和光反应性的表皮生长因子受体（EGFR）靶向抗体片段，7 D12。这通过将用于光活性的光笼化酪氨酸（pcY）和用于光反应性的对苯甲酰基-β-苯丙氨酸（Bpa）位点特异性掺入7 D12中来实现。我们确定了在7 D12中安装Bpa的位置，该位置在没有光的情况下对7 D12-EGFR结合亲和力具有最小的影响。在暴露于365 nm光时，这种含Bpa的7 D12突变体以抗原特异性方式与EGFR形成共价键。然后，我们开发了一种方法，用于在7 D12中的两个不同位点处位点特异性掺入pcY和Bpa。最后，我们证明了在没有光的情况下，这种含有pcY和Bpa的7 D12突变体不与EGFR结合，但用365 nm光照射激活了（1）特异性结合和（2）与EGFR形成共价键。开发了一种通用的方法，用于将非天然的光笼和光反应性氨基酸双位点特异性掺入到活细胞中表达的蛋白质中，从而能够工程化光反应性光活性抗体片段。
Design of biomolecules that perform two or more distinct functions in response to light remains challenging. Here, we have introduced concurrent photoactivity and photoreactivity into an epidermal growth factor receptor (EGFR)-targeting antibody fragment, 7D12. This was achieved by site-specific incorporation of photocaged tyrosine (pcY) for photoactivity and p-benzoyl-ʟ-phenylalanine (Bpa) for photoreactivity into 7D12. We identified a position for installing Bpa in 7D12 that has minimal effect on 7D12–EGFR binding affinity in the absence of light. Upon exposure to 365-nm light, this Bpa-containing 7D12 mutant forms a covalent bond with EGFR in an antigen-specific manner. We then developed a method for site-specific incorporation of pcY and Bpa at two distinct sites in 7D12. Finally, we demonstrated that in the absence of light, this pcY- and Bpa-containing mutant of 7D12 does not bind to EGFR, but irradiation with 365-nm light activates (1) specific binding and (2) covalent bond formation with EGFR. Development of a generalized method for dual site-specific incorporation of nonnatural photocaged and photoreactive amino acids into proteins expressed in live cells enabled engineering of a photoreactive photoactive antibody fragment.
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影响因子：
4.6
作者：
Krüwel T;Nevoltris D;Bode J;Dullin C;Baty D;Chames P;Alves F
通讯作者：
Alves F
影响因子：
64.8
作者：
Jumper J;Evans R;Pritzel A;Green T;Figurnov M;Ronneberger O;Tunyasuvunakool K;Bates R;Žídek A;Potapenko A;Bridgland A;Meyer C;Kohl SAA;Ballard AJ;Cowie A;Romera-Paredes B;Nikolov S;Jain R;Adler J;Back T;Petersen S;Reiman D;Clancy E;Zielinski M;Steinegger M;Pacholska M;Berghammer T;Bodenstein S;Silver D;Vinyals O;Senior AW;Kavukcuoglu K;Kohli P;Hassabis D
通讯作者：
Hassabis D
DOI：
10.1073/pnas.151260298
发表时间：
2001-07-17
影响因子：
11.1
作者：
Chmura, AJ;Orton, MS;Meares, CF
通讯作者：
Meares, CF
影响因子：
4
作者：
Islam M;Kehoe HP;Lissoos JB;Huang M;Ghadban CE;Berumen Sánchez G;Lane HZ;Van Deventer JA
通讯作者：
Van Deventer JA
DOI：
10.1073/pnas.172226299
发表时间：
2002-08-20
影响因子：
11.1
作者：
Chin, JW;Martin, AB;Schultz, PG
通讯作者：
Schultz, PG