核不均一核糖核蛋白K对塞内卡病毒IRES依赖性翻译及病毒复制影响的研究
核不均一核糖核蛋白K对塞内卡病毒IRES依赖性翻译及病毒复制影响的研究
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DOI：
10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0195
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发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
韩世充
中科院分区：
文献类型：
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作者：
张璐;李露;李名洋;樊帅;何文瑞;张雨杭;万博;韩世充
基于前期塞内卡病毒(SVA)内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)的互作组学数据,本研究首先利用生物素标记RNA亲和捕捉技术和RNA免疫共沉淀试验,证实核不均一核糖核蛋白K(hnRNP K)与SVA基因组互作,且利用MTS试验证实敲降或过表达hnRNP K对细胞活性影响不显著。为深入探究hnRNP K在SVA复制过程中的功能,本研究利用Western-blot和TCID_(50)试验检测hnRNP K蛋白对SVA病毒蛋白表达和病毒滴度的影响,结果显示,敲降hnRNP K显著降低病毒蛋白VP2的表达量及病毒滴度,而过表达hnRNP K则显著增加VP2表达量及病毒滴度。利用间接免疫荧光和核质分离试验观察病毒感染对hnRNP K亚细胞定位的影响,发现SVA感染可诱导hnRNP K由细胞核向细胞质移位。通过双荧光素酶报告基因试验检测hnRNP K对帽依赖性翻译和SVA IRES依赖性翻译活性的影响,结果表明,敲降和过表达hnRNP K蛋白均对帽依赖性翻译活性无显著影响,敲降hnRNP K显著降低SVA IRES依赖性翻译活性,而过表达hnRNP K则显著增强IRES翻译活性。综上所述,本研究证实hnRNP K是SVA的关键反式作用因子,正调控病毒IRES依赖性翻译及病毒复制,为深入了解小RNA病毒蛋白翻译和复制的分子机制提供了新的见解。