Expression and Characterization of Chicken Muscle Ecto‐ATPase in Mammalian COS Cells
Expression and Characterization of Chicken Muscle Ecto‐ATPase in Mammalian COS Cells
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鸡肌肉外源 ATP 酶在哺乳动物 COS 细胞中的表达和表征
DOI：
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发表时间：
1999
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
Thomas M. Smith
中科院分区：
文献类型：
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作者：
T. Kirley;Lamar K Gerber;Thomas M. Smith
鸡肌肉外源 ATP 酶具有许多其他 E 型 ATP 酶所没有的不寻常的酶动力学和特性。为了确定鸡外源 ATP 酶的独特特性是否是蛋白质序列中固有的，而不是由鸡系统的某些独特特性介导的，我们将编码外源 ATP 酶的两个部分 cDNA 拼接在一起。 COS（绿猴肾）细胞表达的蛋白质的酶特性与纯化的鸡肫胞外 ATP 酶没有区别，包括通过交联和凝集素对膜结合活性产生 2 至 3 倍的刺激，这是大多数其他 E 型 ATP 酶所不具备的特性。表达的酶对三磷酸核苷酸具有特异性（ATPase:ADPase 水解比例为 26:1），并被 Cibacron Blue 抑制（IC 10 muM）。活性表达酶 = 50 可以用 Cibacron Blue 进行亲和纯化，相对抗去糖基化，并且比其他 E 型 ATP 酶稳定性差。在衣霉素存在下的表达导致无活性的、未折叠的酶。
Chicken muscle ecto‐ATPase has unusual enzyme kinetics and properties not found in many other E‐type ATPases. To determine whether the unique properties of the chicken ecto‐ATPase are inherent in the protein sequence and not mediated by some unique property of the chicken system, we have spliced together two partial cDNAs encoding the ecto‐ATPase. The enzymatic properties of the COS (green monkey kidney)cell‐expressed protein are indistinguishable from the purified chicken gizzard ecto‐ATPase, including a 2‐ to 3‐fold stimulation of membrane‐bound activity by crosslinking and lectins, properties not shared by most other E‐type ATPases. The expressed enzyme is specific for nucleotide triphosphates (ATPase:ADPase hydrolysis ratio of 26:1) and is inhibited by Cibacron Blue (IC 10 mu M). The active, expressed enzyme = 50 can be affinity‐purified with Cibacron Blue, is relatively resistant to deglycosylation, and is less stable than other E‐type ATPases. Expression in the presence of tunicamycin resulted in an inactive, unfolded enzyme.
DOI：
10.1016/s0021-9258(18)61070-1
发表时间：
1987-07
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
P. Matsudaira
通讯作者：
P. Matsudaira
影响因子：
15.9
作者：
Marcus, AJ;Broekman, MJ;Maliszewski, CR
通讯作者：
Maliszewski, CR
通过寡聚状态控制细胞膜外源 ATP 酶：分子间交联调节 ATP 酶活性。
影响因子：
2.9
作者：
Stout,JG;Kirley,TL
通讯作者：
Kirley,TL