Attachment of reporter groups to specific, selected cytidine residues in RNA using a bisulfite-catalyzed transamination reaction.
Attachment of reporter groups to specific, selected cytidine residues in RNA using a bisulfite-catalyzed transamination reaction.
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使用亚硫酸氢盐催化的氨基转移反应将报告基团附着到 RNA 中特定的、选定的胞苷残基上。
DOI：
10.1093/nar/12.2.989
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发表时间：
1984
影响因子：
14.9
通讯作者：
Draper,DE
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Draper,DE
亚硫酸氢盐催化胞苷在N4位的转氨作用;已研究了该反应用于将报告基团连接到RNA分子中选定的胞苷残基的适用性。在42 ℃下用乙二胺（pK 1 = 7.6）和亚硫酸氢盐处理3小时后，聚（C）几乎定量转化为聚（N4氨乙基-C）衍生物。该衍生物与N-羟基琥珀酰亚胺酯定量反应;证明了荧光染料nitrohenzofurazan通过该反应与胞苷的连接。为了将亚硫酸氢盐反应引导至大RNA分子内的选定胞苷，RNA与含有缺失的互补DNA杂交。只有单链RNA环中的胞苷（对应于DNA缺失）具有反应性。用这种技术修饰了16 S核糖体RNA的340个碱基的RNA片段中间的两个胞苷。
Bisulfite catalyzes transamination of cytidine at the N4position; the suitability of this reaction for attaching reporter groups to selected cytidine residues in RNA molecules has been investigated. Poly(C) is nearly quantitatively converted to the poly (N4aminoethyl-C) derivative after 3 hrs at 42°C with ethylene diamine (pK1= 7.6) and bisulfite. This derivative reacts quantitatively with N-hydroxysuccinimide esters; the linkage of a fluorescent dye, nitrohenzofurazan, to cytidines by this reaction is demonstrated. To direct the bisulfite reaction to selected cytidines within a large RNA molecule, the RNA is hybridized to complementary DNA containing a deletion. Only the cytidines in the single strand RNA loop (corresponding to the DNA deletion) are reactive. Two cytidines in the middle of a 340 base RNA fragment from 16S rihosomal RNA have been modified by this technique.
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