PRODUCTION OF POLYOMAVIRUS-LIKE PARTICLES IN A Klgal80 KNOCKOUT STRAIN OF THE YEAST Kluyveromyces lactis
PRODUCTION OF POLYOMAVIRUS-LIKE PARTICLES IN A Klgal80 KNOCKOUT STRAIN OF THE YEAST Kluyveromyces lactis
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乳酸克鲁维酵母 Klgal80 敲除菌株中多瘤病毒样颗粒的产生
DOI：
10.1080/10826068.2012.750613
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发表时间：
2013
影响因子：
2.9
通讯作者：
Lilie H
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Simon C;Schaepe S;Breunig KD;Lilie H
VP1是多瘤病毒的主要外壳蛋白，如果在真核细胞中表达，它可以在细胞内组装成病毒样颗粒。在这里，非常规酵母克鲁维酵母被用于生产小鼠多瘤病毒的病毒样颗粒。VP1的外源基因已整合到GAL/LAC基因的LAC4位点上。因此，VP1的表达受激活剂KlGal4p和抑制因子KlGal80p的相互作用调节。这种克隆策略将vp1的产生与β-半乳糖苷酶的产生相结合，从而允许通过测量β-半乳糖苷酶的活性来快速监测重组蛋白的生产过程。产生了AKlgal80基因敲除菌株，用于VP1的结构性表达和VLP的连续生产。高密度发酵结果表明：(1)乳酸克鲁维酵母普遍适合于VLP的生产；(2)Klgal80基因敲除菌株的重组VP1产量较高，经层析纯化后的VLP可达总蛋白的87%(w/w)，与传统的体外组装VLP相比，VLP具有45 nm大小的均一颗粒和较高的抗蛋白水解性。这表明在酵母中产生的病毒样颗粒具有极好的稳定性。本文还提供了补充材料。请转到出版商的《准备生物化学与生物技术》在线版，查看补充文件。
VP1, the major coat protein of polyomavirus, assembles intracellularly to virus-like particles if expressed in eukaryotes. Here, the nonconventional yeastKluyveromyces lactiswas used for production of virus-like particles of murine polyomavirus. The heterologous gene of VP1 was integrated in theLAC4locus of theGAL/LACgenes. Consequently the expression of VP1 is regulated by the interplay of the activator KlGal4p and inhibitor KlGal80p. This cloning strategy couples the production of VP1 to that of the enzyme β-galactosidase, allowing a fast alternative for monitoring the course of recombinant protein production by measuring the β-galactosidase activity. AKlgal80knockout strain was generated for a constitutive expression of VP1 and a continuous VLP production. High-cell-density fermentation showed that (1)Kluyveromyces lactisis generally suitable for VLP production and (2) theKlgal80knockout strain produces higher amounts of recombinant VP1.Furthermore, VLPs could be purified chromatographically to 87% (w/w) of total protein, and showed a homogeneous species of 45-nm particles and a high resistance against proteolysis compared to conventional in vitro assembled VLPs. This demonstrates the superior stability of virus-like particles produced in yeast. Supplemental materials are available for this article. Go to the publisher's online edition ofPreparative Biochemistry and Biotechnologyto view the supplemental file.
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影响因子：
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L. Montross;Simon C Watkins;R. Moreland;H. Mamon;D. Caspar;R. Garcea
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发表时间：
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期刊：
影响因子：
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作者：
通讯作者：
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Adamec, T;Palková, Z;Forstová, J
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Forstová, J