Micro-minicircle Gene Therapy: Implications of Size on Fermentation, Complexation, Shearing Resistance, and Expression.
Micro-minicircle Gene Therapy: Implications of Size on Fermentation, Complexation, Shearing Resistance, and Expression.
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DOI：
10.1038/mtna.2013.67
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发表时间：
2014-01-07
期刊：
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--
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
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作者：
微环（MC），仅由真核生物序列组成，是一种有趣的方法，以提高基于质粒的基因治疗载体的安全性和效率。在本文中，我们研究了微MC（miMC）载体编码的小调控RNA。我们使用编码剪接校正U7小核RNA的构建体，与携带相同表达盒的常规3600 bp质粒相比，其产生650个碱基对（bp）的载体。此外，我们构建了携带不同数量的这些盒的不同大小的miMCs。这使我们能够评估尺寸如何影响载体的生产、超螺旋、稳定性和效率。我们通过原子力显微镜表征盘绕形态，并测量注射器装置Biojector对剪切力的抵抗力。我们比较了miMCs和质粒在体外使用脂质转染和电穿孔，以及在小鼠体内的行为。我们在这里表明，当miMC的尺寸减小时，二聚体和三聚体的形成增加。对于有效的表达，似乎存在一个较低的大小限制。我们证明，miMCs是更强大的质粒，当暴露于剪切力，并且它们在体内表现出延长的表达。
The minicircle (MC), composed of eukaryotic sequences only, is an interesting approach to increase the safety and efficiency of plasmid-based vectors for gene therapy. In this paper, we investigate micro-MC (miMC) vectors encoding small regulatory RNA. We use a construct encoding a splice-correcting U7 small nuclear RNA, which results in a vector of 650 base pairs (bp), as compared to a conventional 3600 bp plasmid carrying the same expression cassette. Furthermore, we construct miMCs of varying sizes carrying different number of these cassettes. This allows us to evaluate how size influences production, super-coiling, stability and efficiency of the vector. We characterize coiling morphology by atomic force microscopy and measure the resistance to shearing forces caused by an injector device, the Biojector. We compare the behavior of miMCs and plasmids in vitro using lipofection and electroporation, as well as in vivo in mice. We here show that when the size of the miMC is reduced, the formation of dimers and trimers increases. There seems to be a lower size limit for efficient expression. We demonstrate that miMCs are more robust than plasmids when exposed to shearing forces, and that they show extended expression in vivo.
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影响因子：
12.4
作者：
Chen, Zhi-Ying;Riu, Efren;Kay, Mark A.
通讯作者：
Kay, Mark A.
影响因子：
12.4
作者：
Riu, Efren;Chen, Zhi-Ying;Kay, Mark A.
通讯作者：
Kay, Mark A.
DOI：
10.1126/science.1224139
发表时间：
2012-08-31
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Vafabakhsh R;Ha T
通讯作者：
Ha T
DOI：
10.1016/j.bioeng.2005.07.003
发表时间：
2005-12-01
期刊：
BIOMOLECULAR ENGINEERING
影响因子：
--
作者：
Lundin, KE;Hasan, M;Smith, CIE
通讯作者：
Smith, CIE
影响因子：
2.9
作者：
Kang, SH;Cho, MJ;Kole, R
通讯作者：
Kole, R