Insulin receptor substrate-1 associates with small nucleolar RNA which contributes to ribosome biogenesis.
Insulin receptor substrate-1 associates with small nucleolar RNA which contributes to ribosome biogenesis.
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DOI：
10.3389/fendo.2014.00024
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发表时间：
2014
影响因子：
5.2
通讯作者：
Takahashi S
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ozoe A;Sone M;Fukushima T;Kataoka N;Chida K;Asano T;Hakuno F;Takahashi S
众所周知，胰岛素受体底物（IRS）在介导胰岛素样生长因子（IGF）/胰岛素的细胞内信号中发挥着至关重要的作用。之前，我们证明 IRS-1 形成含有 RNA 的高分子复合物。为了鉴定 IRS-1 复合物中的 RNA，我们使用表达 FLAG–IRS-1 和 FLAG–IRS-2 的 HEK293 细胞进行了紫外线 (UV) 交联和免疫沉淀分析。我们在 FLAG-IRS-1 的免疫沉淀物中检测到与紫外线照射成比例的放射性信号，但在 FLAG-IRS-2 的免疫沉淀物中未检测到放射性信号，这表明 RNA 与 IRS-1 直接接触。然后通过 RT-PCR 扩增与 IRS-1 交联的 RNA，然后进行序列分析。我们分离出 25 种信使 RNA 和 8 种非编码 RNA 的序列标签，包括小核仁 RNA (snoRNA)。我们重点关注 IRS-1 与 U96A snoRNA (U96A) 及其宿主 Rack1（激活 C 激酶 1 的受体）前 mRNA 的相互作用。我们通过 IRS-1 免疫沉淀随后进行 Northern 印迹或 RT-PCR 分析，证实了 IRS-1 与 U96A 以及与 RACK1 前 mRNA 的相互作用。 IRS-1−/−小鼠胚胎成纤维细胞中成熟的U96A在数量上低于WT。我们还发现核 IRS-1 的一部分位于卡哈尔体（Cajal body）中，卡哈尔体是 snoRNA 成熟的核亚区室。 IRS-1 在 snoRNA 生物发生中的意想不到的功能凸显了 RNA 相关 IRS-1 复合物的潜力，开辟了一条新的研究路线，以剖析调节 IGF/胰岛素介导的生物事件的新机制。
Insulin receptor substrates (IRSs) are well known to play crucial roles in mediating intracellular signals of insulin-like growth factors (IGFs)/insulin. Previously, we showed that IRS-1 forms high molecular mass complexes containing RNAs. To identify RNAs in IRS-1 complexes, we performed ultraviolet (UV) cross-linking and immunoprecipitation analysis using HEK293 cells expressing FLAG–IRS-1 and FLAG–IRS-2. We detected the radioactive signals in the immunoprecipitates of FLAG–IRS-1 proportional to the UV irradiation, but not in the immunoprecipitates of FLAG–IRS-2, suggesting the direct contact of RNAs with IRS-1. RNAs cross-linked to IRS-1 were then amplified by RT-PCR, followed by sequence analysis. We isolated sequence tags attributed to 25 messenger RNAs and 8 non-coding RNAs, including small nucleolar RNAs (snoRNAs). We focused on the interaction of IRS-1 with U96A snoRNA (U96A) and its host Rack1 (receptor for activated C kinase 1) pre-mRNA. We confirmed the interaction of IRS-1 with U96A, and with RACK1 pre-mRNA by immunoprecipitation with IRS-1 followed by Northern blotting or RT-PCR analyses. Mature U96A in IRS-1−/− mouse embryonic fibroblasts was quantitatively less than WT. We also found that a part of nuclear IRS-1 is localized in the Cajal body, a nuclear subcompartment where snoRNA mature. The unanticipated function of IRS-1 in snoRNA biogenesis highlights the potential of RNA-associated IRS-1 complex to open a new line of investigation to dissect the novel mechanisms regulating IGFs/insulin-mediated biological events.
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影响因子：
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作者：
Lassak, A;Del Valle, L;Reiss, K
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作者：
Hirose, T;Shu, MD;Steitz, JA
通讯作者：
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DOI：
10.1083/jcb.201107093
发表时间：
2011-10-03
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Ninomiya K;Kataoka N;Hagiwara M
通讯作者：
Hagiwara M
影响因子：
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作者：
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通讯作者：
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