基于单质粒拯救系统的塞内卡病毒感染性克隆的构建与生物学特性
基于单质粒拯救系统的塞内卡病毒感染性克隆的构建与生物学特性
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DOI：
10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0185
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发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
张改平
中科院分区：
文献类型：
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作者：
史燕;李名洋;樊帅;胡曼;张雨杭;何文瑞;万博;韩世充;张改平
参考甲型塞内卡病毒(SVA)CH/HuB/2017株全基因组序列,构建SVA通用型载体,合成SVA Frag Ⅰ和Frag Ⅱ基因片段,并通过无缝克隆技术依次将病毒基因片段插入通用型载体,获得包含病毒全基因组的真核转录质粒pcDNA-SVA;经双酶切和测序验证后,在IBRS-2细胞上进行转染和传代,以获得拯救毒株rSVA-CH/HuB/2017;经遗传稳定性评价后,利用蛋白免疫印迹、间接免疫荧光和半数组织培养感染量等试验,鉴定和分析拯救毒株在猪肾细胞系IBRS-2和PK-15中的生物学特性。结果显示,重组质粒pcDNASVA直接转染普通敏感细胞系IBRS-2,即可快速拯救出含有沉默突变Nhe Ⅰ分子标记的毒株,且具有良好的遗传稳定性;拯救毒株和野生亲本毒株在IBRS-2和PK-15细胞中的复制和增殖特性相似。结果表明,通过建立一种基于T7启动子、RNA聚合酶Ⅱ启动子、终止子、核酶HamRz和HDVRz等元件的SVA单质粒高效拯救系统,可以在质粒水平快速编辑病毒基因组,为定向改造和拯救病毒提供了基础性技术平台。